Tofauti Muhimu – Benzonase dhidi ya DNase
Uharibifu wa asidi nucleiki ni muhimu kwa mbinu nyingi za baiolojia ya molekuli. Inatumiwa sana katika teknolojia ya recombinant ya DNA ili kuondokana na vipande visivyohitajika vya DNA na RNA. Enzymes zinazoharibu asidi ya nyuklia huitwa Nucleases, na zinaweza kuwa za aina tofauti kulingana na kazi inayohitajika. Nucleases zinazoharibu DNA hujulikana kama DNases ilhali zile zinazodhalilisha RNA zinajulikana RNases. Enzymes hizi hutumiwa zaidi katika majaribio ya ndani ambapo majaribio ya molekuli ya vitro hufanywa ili kutenga DNA safi, RNA au protini. Benzonasi ni aina ya viini vinavyoharibu DNA na RNA ilhali DNases huharibu DNA pekee. Hii ndiyo tofauti kuu kati ya Benzonase na DNase.
Benzonase ni nini?
Benzonase ni endonuclease iliyobuniwa kwa vinasaba kutoka Serratia marcescens. Kimeng'enya hiki huzalishwa katika vipawa vya E. koli katika kiwango cha viwanda. Benzonase ina uwezo wa kuchanika DNA yenye nyuzi mbili, DNA ya mstari, DNA ya duara na RNA yenye nyuzi moja. Hivyo Benzonase ni muhimu kibiashara. Kimeng'enya cha Benzonasi ni dimer ya protini ambayo ina asidi amino 245 zinazofanana, ~ 30 kDa subunits zenye vifungo viwili muhimu vya disulfidi. Benzonase hupasua asidi nucleiki kwenye mwisho wake wa 5 na kusababisha vipande vilivyo na ncha 5 za bure. Benzonase inaweza kupasua asidi nucleic kwa mfuatano wowote lakini inapendelea maeneo tajiri ya GC.
Benzonase imehifadhiwa kwa -20 0C. PH bora zaidi kwa shughuli ya kimeng'enya hupatikana kuwa 8.0 - 9.2. Utumizi wa Benzonase ni pamoja na utayarishaji wa sampuli kwa ajili ya electrophoresis ya gel ya 2D ya protini ambapo Benzonase huondoa asidi ya nukleiki iliyofungamana na kuondolewa kwa uchafu wa asidi ya nukleiki kutoka kwa matayarisho ya protini yanayoambatana. Pia hutumika kupunguza mnato wa dondoo za protini na kuzuia msongamano wa seli katika mchanganyiko wa seli.
DNase ni nini?
DNase ni kiini, kimeng'enya cha hidrolitiki ambacho kinaweza tu kupasua DNA yenye nyuzi mbili. Kuna aina mbili kuu za DNase: DNase I na DNase II. DNase I hushiriki katika kuchambua DNA yenye nyuzi mbili ili kutoa polynucleotidi zenye ncha 5’ zisizolipishwa. DNase II inahusika katika kupasua DNA yenye nyuzi mbili ili kutoa nyuzi za polynucleotidi zenye ncha 3’ zisizolipishwa au zinazoning'inia.
DNase I
DNase I hufanya kazi kwa pH bora kati ya 7.0 - 8.0. Shughuli ya kimeng'enya hutegemea viambajengo vingi vya ionic ambavyo ni pamoja na, Ca2+, Mg2+ au Mn2+Shughuli ya Mg2+ na Mn2+ huamua utendakazi wa DNase I. Mbele ya Mg 2+, DNase I hupasua kila uzi wa dsDNA kivyake. Hii hufanyika kwa njia ya nasibu. Kinyume chake, mbele ya Mn2+, kimeng'enya hupasua viaro vyote viwili vya DNA kwa takriban tovuti moja. Upasuaji huu utasababisha kutoa aina mbili za vipande vya DNA; aina moja yenye ncha butu na aina nyingine yenye mialemo ya nyukleotidi moja au mbili.
Kielelezo 02: DNase
DNase II
Hutenda kazi za DNase II katika pH bora zaidi ya 4.5-5.0 na ioni za metali za divalent zinahitajika kwa shughuli zake, sawa na DNase I. Utaratibu wa DNase II unajulikana kuwa na hatua kuu tatu.
- Nyeo nyingi za uzi mmoja huingizwa ndani ya uti wa mgongo wa DNA.
- Nyukleotidi zinazoyeyuka kwa asidi na oligonucleotidi hutengenezwa.
- Mabadiliko ya hyperchromic yasiyo ya mstari hutokea katika awamu ya mwisho.
Vizuizi vikuu vya kimeng'enya cha DNase ni pamoja na chelata za chuma, metali za mpito na kemikali kama vile Sodium dodecyl sulfate na β - mercaptoethanol.
Matumizi makuu ya DNase ni pamoja na utayarishaji wa dondoo za RNA zisizo na DNA na dondoo za protini, na kuondolewa kwa violezo vya DNA wakati wa majaribio ya unukuzi wa in vitro.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Benzonase na DNase?
- Zote mbili ni vimeng'enya vya hidrolitiki.
- Zote mbili ni nukleasi.
- Wote wawili hushiriki kwa kuvunja vifungo vya phosphodiester ya asidi nucleic.
- Zote zinahitaji pH ya juu na halijoto ya kuhifadhi ili kudumisha shughuli ya kimeng'enya.
- Vizuizi vya vimeng'enya ni pamoja na chelating, metali za mpito, na kemikali za sabuni.
- Maombi yanalenga zaidi kupata dondoo za ubora wa juu za DNA, RNA na protini.
- Enzymes zote mbili zinaweza kuzalishwa kupitia uhandisi jeni.
Kuna tofauti gani kati ya Benzonase na DNase?
Benzonase dhidi ya DNase |
|
| Benzonase ni kimeng'enya chenye uwezo wa kupasua DNA yenye mistari miwili, DNA ya mstari, DNA ya duara na RNA. | DNase ni kimeng'enya chenye uwezo wa kupasua DNA yenye mistari miwili. |
| Substrate kwa Enzyme | |
| DNA na RNA zote ni vijiti kidogo vya benzonase. | DNA ndio sehemu ndogo ya DNase. |
| Muundo | |
| Kiwango bora cha pH cha Benzonase ni 7.0 -8.0 | Viwango bora vya pH vya DNase I ni 7.0 – 8.0 na DNase II ni 4.5 – 5.0. |
Muhtasari – Benzonase dhidi ya DNase
Enzymes za nyuklia hutumika sana katika taratibu tofauti za majaribio kuhusiana na baiolojia ya molekuli na uhandisi jeni. Benzonase na DNase ni aina mbili za nukleasi. Benzonase inahusika katika kudhalilisha DNA na RNA ilhali DNase inahusika katika kupasua DNA yenye ncha mbili. Hii ndio tofauti ya kimsingi kati ya benzonase na DNase. Kwa sasa, aina hizi mbili za nuklea huzalishwa kupitia teknolojia ya DNA iliyounganishwa tena ambayo hutoa vimeng'enya vya ubora wa juu ambavyo vinaboreshwa kwa uzalishaji wa juu zaidi.
Pakua Toleo la PDF la Benzonase dhidi ya DNase
Unaweza kupakua toleo la PDF la makala haya na uitumie kwa madhumuni ya nje ya mtandao kulingana na dokezo la manukuu. Tafadhali pakua toleo la PDF hapa Tofauti Kati ya Benzonase na DNase
