Tofauti Muhimu – Nitrocellulose dhidi ya PVDF
Ukaushaji wa Magharibi ni mbinu inayoruhusu ugunduzi na ukadiriaji wa protini mahususi kutoka kwa sampuli ya protini. Kuegemea kwa mbinu inategemea uteuzi wa membrane sahihi ya kunyonya protini kutoka kwa gel. Kuna aina tofauti za utando wa microporous. Nitrocellulose na utando wa PVDF ni utando mbili kama hizo zinazopendelewa na watafiti kwa sababu ya sifa zao maalum juu ya aina zingine za utando. Uteuzi kati ya nitrocellulose au PVDF pia ni changamoto nyingine katika ukaushaji wa kimagharibi. Nitrocellulose na PVDF zote zina uwezo wa juu wa kunyonya protini. Tofauti kuu kati ya nitrocellulose na utando wa PVDF ni kwamba utando wa nitrocellulose hauna uwezo wa kuondoa kingamwili na kutumia tena utando huo kwa ajili ya kuzuia kingamwili ilhali utando wa PVDF una uwezo wa kung'oa na kutumia tena.
Nitrocellulose ni nini?
Nitrocellulose ni polima iliyotengenezwa kwa kutibu selulosi na asidi ya nitriki na hutumika kutengeneza utando mdogo katika baiolojia ya molekuli, hasa kwa mbinu za kufifisha kama vile ukaushaji wa kusini, kaskazini na magharibi. Ukubwa wa pore wa utando wa nitrocellulose huanzia 3 hadi 20 µm. Utando wa nitrocellulose microporous huwezesha ugunduzi wa mmenyuko wa immunochemical unaotokea kwenye uso wa membrane. Kwa hiyo, utando wa nitrocellulose hutumiwa mara kwa mara kwa uzuiaji wa protini na kutambua protini maalum katika uzuiaji wa magharibi. Utando wa nitrocellulose pia unaweza kuzuia glycoproteini na asidi nucleic.
Tando za Nitrocellulose hupendekezwa katika majaribio ya mtiririko wa upande kutokana na vipengele kadhaa. Utando wa nitrocellulose huchukua protini katika mkusanyiko wa juu. Kiyeyushi kinachotumika kulowesha utando hakipunguzi ufyonzaji wa protini ya utando wa nitrocellulose. Utando wa nitrocellulose unaweza kukatwa kwa urahisi kwa saizi ya gel inayotaka na kuhamisha protini kutoka kwa jeli hadi kwenye utando kwa uhamishaji wa umeme au kapilari. Nitrocellulose huruhusu mtiririko wa haraka wa protini kupitia utando wenye uwezo wa juu wa kumfunga. Nitrocellulose inaonyesha nguvu iliyoboreshwa ya utunzaji. Sifa nyingine maalum ya utando wa nitrocellulose ni kwamba inaweza kubandikwa kwa urahisi na vibandiko visivyoweza kuyeyushwa kwenye viunga mbalimbali vya plastiki.
Kielelezo 01: Nitrocellulose membrane ya blotting ya magharibi
PVDF ni nini?
Polyvinylidene difluoride (PVDF) ni fluoropolymer inayozalishwa na upolimishaji wa vinylidene difluoride na ina uwezo wa juu wa uhamishaji wa protini. Kwa hiyo, utando wa microporous uliofanywa kutoka PVDF hutumiwa katika mbinu za kuzuia magharibi ili kuchambua protini maalum kutoka kwa mchanganyiko wa protini. Utando wa PVDF pia unaweza kutumika kwa uchanganuzi wa asidi ya amino na mpangilio wa protini. Sifa muhimu zaidi ya utando wa PVDF juu ya utando wa nitrocellulose ni kwamba inaweza kuvuliwa kwa urahisi kutoka kwa kingamwili na kutumika tena kwa uchunguzi unaofuata wa kingamwili.
Tando zaPVDF ni nene kuliko utando wa nitrocellulose; kwa hivyo, ni sugu zaidi kwa uharibifu wakati wa kutumia tena. Utando wa PVDF una haidrofobu sana. Kwa hivyo, lazima ziloweshwe kwenye methanoli au isopropanoli kabla ya kuzitumia.
Kuna tofauti gani kati ya Nitrocellulose na PVDF?
Nitrocellulose dhidi ya PVDF |
|
| Nitrocellulose ni polima inayoundwa na selulosi. | PVDF ni fluoropolymer inayozalishwa na upolimishaji wa vinylidene difluoride. |
| Ukubwa wa Matundu ya Utando | |
| Ukubwa wa kawaida wa vinyweleo ni 0.1, 0.2 au 0.45μ | Ukubwa wa kawaida wa vinyweleo ni 0.1, 0.2 au 0.45μm |
| Uwezo wa Kuunganisha Protini | |
| Nitrocellulose ina uwezo wa kumfunga protini wa 80 hadi 100 μg/cm2. | PVDF ina uwezo wa kuunganisha protini wa 170 hadi 200 μg/cm2. |
| Unyeti | |
| Hii ina usikivu wa chini ikilinganishwa na PVDF. | Hii ina usikivu wa hali ya juu. |
| Utambuzi wa Protini zenye Kiwango cha Chini | |
| Kwa vile unyeti ni mdogo katika utando wa nitrocellulose, haifai kutambuliwa kwa protini zenye kiwango cha chini. | Hii inafaa zaidi kwa utambuzi wa protini zenye kiwango cha chini kutokana na unyeti wake wa juu. |
| Kelele ya Mandharinyuma | |
| Hii ina kelele ya chinichini | Hii ina kelele ya juu chinichini. |
| Mwingiliano na Protini | |
| Molekuli za protini hufungamana na utando wa nitrocellulose kupitia mwingiliano wa haidrofobu. | Protini hufungamana na utando wa PVDF kupitia mwingiliano wa haidrofobi na dipole. |
| Asili ya Utando | |
| Nitrocellulose ni brittle na tete. Hata hivyo, matoleo ya nitrocellulose yanapatikana, na ni sugu. | PVDF ni ya kudumu zaidi na ina upinzani wa juu wa kemikali. |
| Uwezo wa Kuvua na Kutumia Tena | |
| Nitrocellulose inaweza kuwa na ugumu wa kuvua na kukata tena bila kupoteza mawimbi. | PVDF ni bora kwa kukagua na kupanga programu. |
| Kufaa | |
| Nitrocellulose ni bora kwa kutambua protini zenye uzito wa chini wa molekuli. | PVDF inafaa zaidi kwa kutambua protini zenye uzito wa juu wa molekuli. |
| Matumizi Mengine | |
| Nitrocellulose inaweza kutumika kwa uchanganuzi wa asidi ya nukleiki na ufutaji wa nukta/nafasi. | PVDF inaweza kutumika kwa mpangilio wa protini na mifumo thabiti ya kupima awamu. |
| Gharama | |
| Hii ni nafuu kuliko membrane za PVDF. | Hii ni ghali zaidi kuliko utando wa nitrocellulose. |
| Haja ya kukojoa mapema | |
| Tando za Nitrocellulose hazihitaji kulowekwa mapema na methanoli | Tando zaPVDF zinahitaji kulowekwa mapema kwa methanoli. |
Muhtasari – Nitrocellulose dhidi ya PVDF
Tando za Nitrocellulose zilikuwa utando wa kwanza kutumika kibiashara kwa upimaji wa mtiririko wa upande. Wana uwezo wa juu wa kunyonya protini. Kwa hiyo, utando wa nitrocellulose hutumiwa katika kufuta magharibi. PVDF ni aina nyingine ya utando unaotumika katika ukaushaji wa magharibi na pia ina uwezo wa juu wa kunyonya protini. Aina zote mbili hutumiwa katika ukaushaji wa magharibi kwa uchambuzi wa protini. Hata hivyo, utando wa PVDF una sifa maalum zaidi, na kuzifanya zifae zaidi kuliko utando wa nitrocellulose kwa ukaushaji wa magharibi. Lakini, utando wa nitrocellulose unafaa zaidi kwa kugundua protini zenye uzito wa chini wa Masi, utando wa PVDF unafaa zaidi kwa kugundua protini zenye uzito wa molekuli. Hii ndio tofauti kati ya utando wa nitrocellulose na PVDF.
