Tofauti kuu kati ya immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja ni kwamba kingamwili ya moja kwa moja hutumia kingamwili moja ambayo hufanya kazi kinyume na lengo la maslahi huku kingamwili isiyo ya moja kwa moja inatumia kingamwili mbili kuweka lebo ya lengo.
Immunofluorescence au upigaji picha wa seli ni mbinu ambayo hutumiwa kutambulisha antijeni lengwa kwa kutumia fluorophore. Hapa, fluorophore ni kiwanja cha kemikali cha umeme ambacho kinaweza kutoa mwanga tena baada ya msisimko wa mwanga. Fluorophore inapofungamana na antijeni lengwa, inaruhusu ugunduzi wa molekuli lengwa kwenye sampuli. Ili kuielezea zaidi, antijeni inapojifunga na kingamwili maalum, inaweza kuunganishwa na fluorophores. Kwa hivyo, ni rahisi kutambua uwepo wa antijeni lengwa kwenye sampuli unapotazama chini ya darubini ya fluorescence.
Mbali na hilo, kuna aina mbili za immunofluorescence; immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja. Tofauti kati ya immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja hasa iko katika idadi ya kingamwili zinazotumiwa na muunganisho wa fluorophore. Hiyo ni, katika immunofluorescence ya moja kwa moja, fluorophore huungana moja kwa moja na kingamwili ya msingi wakati katika immunofluorescence isiyo ya moja kwa moja, fluorophore huungana na kingamwili ya pili.
Direct Immunofluorescence ni nini?
Immunofluorescence hutumia kingamwili kutambua antijeni mahususi lengwa. Immunofluorescence ya moja kwa moja ni moja ya aina mbili za immunofluorescence. Katika immunofluorescence ya moja kwa moja, kingamwili moja (kingamwili ya msingi) inahusisha na fluorophore inaunganishwa moja kwa moja na kingamwili ya msingi. Baada ya kuifunga kingamwili na antijeni lengwa, fluorophore hutoa fluorescence ambayo inaweza kutambuliwa kwa darubini ya fluorescence.
Kielelezo 01: Direct Immunofluorescence
Hata hivyo, immunofluorescence ya moja kwa moja ni njia ya gharama kubwa kwa kuwa kingamwili za msingi zilizounganishwa ni ghali ikilinganishwa na kingamwili za pili. Walakini, haihusishi hatua ya ziada, kwa hivyo, mbinu fupi. Zaidi ya hayo, vifungo visivyo maalum hupunguzwa katika immunofluorescence ya moja kwa moja. Kwa hivyo, utendakazi wa aina mbalimbali ni mdogo. Lakini katika kugundua, unyeti wa immunofluorescence ya moja kwa moja ni dhaifu kwa kulinganisha na immunofluorescence isiyo ya moja kwa moja.
Indirect Immunofluorescence ni nini?
Indirect immunofluorescence ni aina ya pili ya immunofluorescence ambayo inahusisha aina mbili za kingamwili kama vile kingamwili za msingi na za upili katika kuweka lebo ya antijeni lengwa. Kwa njia hii, fluorophore huunganishwa na kingamwili ya pili. Kwa hivyo, mbinu hii inahusisha hatua ya ziada.
Kielelezo 02: Immunofluorescence
Hata hivyo, unyeti ni mkubwa katika njia hii kwa kuwa fluorophore kadhaa zinaweza kuunganishwa na kingamwili za pili na hurahisisha utambuzi. Zaidi ya hayo, immunofluorescence isiyo ya moja kwa moja ni ya gharama nafuu kutokana na ukweli kwamba muunganisho wa kingamwili za sekondari ni ghali na rahisi. Ikilinganishwa na immunofluorescence ya moja kwa moja, aina ya utendakazi mtambuka ni mkubwa katika mbinu isiyo ya moja kwa moja.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja?
- Ni aina mbili za mbinu ya immunofluorescence.
- Kingamwili msingi na fluorophore huhusisha katika mbinu zote mbili.
- Pia, mmenyuko wa antijeni-antibody hutokea kwa mbinu zote mbili.
- Aidha, kingamwili za moja kwa moja na zisizo za moja kwa moja hutumia hadubini ya fluorescence kugundua antijeni.
Kuna tofauti gani kati ya Immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja?
Immunofluorescence inaweza kuwa ya moja kwa moja au isiyo ya moja kwa moja kulingana na muunganisho wa fluorophore na kingamwili zinazotumiwa. Katika immunofluorescence ya moja kwa moja, fluorophore inaunganishwa na antibody ya msingi, ambayo ni antibody moja ambayo inahusisha katika mbinu hii. Kinyume na hilo, katika immunofluorescence isiyo ya moja kwa moja, fluorophore inaunganishwa na antibody ya sekondari, ambayo ni mojawapo ya aina mbili za antibodies zinazohusika katika mbinu. Kwa hivyo, tofauti kuu kati ya immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja ni aina ya kingamwili inayoungana na fluorophore.
Infographic ifuatayo inatoa ulinganisho wa kando wa tofauti kati ya immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja.
Muhtasari – Direct vs Indirect Immunofluorescence
Immunofluorescence ni mbinu ambayo hutumiwa kutambua kuwepo kwa antijeni mahususi katika sampuli. Mbinu hii hutumia antibodies maalum. Kwa hiyo, katika hili, antibodies huunganishwa na fluorophores ili kuzigundua kwa kutumia darubini ya fluorescent. Aidha, kuna aina mbili za immunofluorescence yaani, immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja. Kingamwili moja kwa moja huhusisha kingamwili moja na fluorophore iliyounganishwa moja kwa moja na kingamwili hii. Immunofluorescence isiyo ya moja kwa moja inahusisha antibodies mbili; msingi na sekondari na fluorophore kuunganishwa kwa kingamwili ya pili. Kwa kuwa kingamwili kadhaa za sekondari zinaweza kushikamana na kingamwili ya msingi na fluorophores kadhaa zinaweza kuunganishwa na kingamwili za sekondari, immunofluorescence isiyo ya moja kwa moja ni njia nyeti zaidi kuliko njia ya moja kwa moja. Zaidi ya hayo, njia isiyo ya moja kwa moja ni ghali zaidi kuliko njia ya moja kwa moja. Kwa hivyo, hii ndiyo tofauti kati ya immunofluorescence ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja.
