Tofauti Muhimu – Uwekaji Joto dhidi ya Baridi
Ujazaji Joto na Ubaridi ni mbinu mbili zinazotumika katika utenganishaji wa seli za enzymatic katika ukuzaji wa seli za wanyama. Tofauti kuu kati ya trypsinization ya joto na baridi, kama majina yanavyopendekeza, inategemea halijoto ambayo trypsin huongezwa kwa utenganishaji wa seli. Ujazaji wa trypsinization ya joto hufanyika chini ya hali ya juu ya joto (36.5 - 37 0C) ilhali ujazo wa trypsinization baridi hufanyika chini ya hali ya joto la chini.
Wakati wa mchakato wa ukuzaji seli msingi za seli za wanyama, kuna mbinu tatu kuu zinazotumika na zimeonekana kuwa na mafanikio. Mbinu hizo tatu ni pamoja na utenganishaji wa seli kimitambo, utenganishaji wa seli za enzymatic na mbinu ya msingi ya kupandikiza. Mgawanyo wa enzymatic wa seli unaopelekea kutengwa kwa seli na hufanywa na kimeng'enya kinachoharibu protini trypsin. Kwa hivyo, mchakato huu unaitwa Trypsinization. Ujazaji wa trypsinization unaweza kufanywa chini ya hali mbili tofauti, yaani, Kujaza kwa Joto kwa Trypsinization na Cold Trypsinization. Ujazaji wa trypsin joto ni njia ya kutibu seli na trypsin chini ya hali ya joto kwa joto la 36.5 - 37 0C. Ujazaji wa trypsin ni mchakato wa matibabu ya trypsin ambao hufanyika chini ya hali ya baridi zaidi ikiwezekana katika barafu inayodumisha halijoto ya chini sana.
Je, Kujaza Joto ni nini?
Ujaribio unaweza kufanywa ili kutenganisha vijenzi vya seli ili kutenganisha seli ili kutoa utamaduni msingi wa seli. Trypsin ni kimeng'enya cha uharibifu wa protini, na mchanganyiko wa kimeng'enya unaotumika katika ufanyaji wa trypsinization unaweza kuwa ama dondoo ghafi au bidhaa iliyosafishwa. Dondoo ghafi linasemekana kuwa na ufanisi zaidi katika uchanganuzi wa protini na mtengano wa seli kwa kuwa lina vimeng'enya vingine vya uharibifu.
Ujazaji wa trypsinization joto ndiyo njia inayotumika sana ya enzymatic kwa utenganishaji wa seli ambao hufanyika chini ya hali ya juu ya joto. Kabla ya matibabu kwa trypsinization, tishu zinazohitajika hukatwa vipande vidogo. Inawezesha mchakato rahisi wa kugawanya. Kisha kitambaa kilichokatwa huoshwa kwa chombo maalum kinachojulikana kama Dissection Basal S alt medium.
Baada ya kukamilika kwa hatua ya kuosha, seli hubadilishwa kuwa chupa iliyo na kimeng'enya amilifu, ambacho ni trypsin. Kwa vile mbinu hii inadokeza itifaki joto ya trypsinization, trypsin huwekwa kwenye joto la karibu 37 0C kwa takriban saa nne.
Kielelezo 01: Trypsin
Yaliyomo yamechanganywa na kuchochewa kwa kutumia mbinu za uwekaji katikati kwa urahisi wa itifaki na kuharakisha mchakato wa utenganishaji. Baada ya muda uliopendekezwa kufikiwa, seli zinaweza kutolewa kutoka kwa nguvu kuu. Seli zinazotokana na nguvu kuu kisha hudumishwa kwa halijoto na wakati fulani.
Kujaza Baridi ni nini?
Ujazaji wa trypsinization baridi ni aina nyingine ya trypsinization ambayo hufanyika chini ya hali ya baridi. Katika mbinu hii, seli ambazo hukatwa na kuosha huwekwa kwenye bakuli kwenye barafu na kisha kulowekwa na trypsin. Kipindi cha kuloweka ni kirefu zaidi – kama saa 6 – 24.
Baada ya kukamilika kwa utaratibu wa kuloweka, trypsin hutolewa kutoka kwa seli ya seli, na vipande vya tishu hudumishwa zaidi saa 37 0C kwa takriban dakika 20 – 30. Mgawanyiko wa seli huletwa na bomba la mara kwa mara la mchanganyiko wa tishu. Hii itaruhusu seli kujitenga na utando na kuja kwa nguvu kuu. Mara seli zinapokuwa kwenye nguvu kuu, hudumishwa na kukuzwa kwa halijoto na muda unaohitajika.
Njia ya kujaribisha baridi ina faida kadhaa
- Mavuno ya juu ya seli zinazoweza kutumika kadri uharibifu wa seli unavyopungua. Uharibifu wa seli hupunguzwa kwa kutotumia hatua za uwekaji katikati.
- Njia rahisi sana.
- Kufanya kazi kidogo.
Kizuizi kikuu cha mbinu ya uwekaji trypsinization baridi ni kwamba idadi kubwa haiwezi kutumika katika tukio moja.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Upasuaji Joto na Baridi?
- Michakato ya uongezaji wa trypsin Joto na Baridi hutumia kimeng'enya cha trypsin katika utenganishaji wa seli.
- Michakato ya Ujazaji Joto na Baridi hutumika katika taratibu za utamaduni wa seli kwa utenganishaji wa seli.
- Katika taratibu zote mbili za matibabu ya Ujazaji wa Tripsinization Joto na Baridi, seli huchukuliwa kutoka kwa nguvu kuu.
Kuna Tofauti gani Kati ya Ujazaji Joto na Baridi?
Uongezaji joto dhidi ya Baridi |
|
| Trypsinization joto ni njia ya kutibu seli na trypsin chini ya hali ya joto katika joto la 36.5 - 37 0. | Ujazaji wa trypsin ya baridi ni mchakato wa matibabu ya trypsin ambayo hufanyika chini ya hali ya baridi zaidi ikiwezekana katika barafu inayohifadhi halijoto ya chini sana. |
| Itifaki | |
| Vipande vya tishu vilivyokatwa hudumishwa kwa 37 0C mfululizo katika mchakato wote. | Vipande vya tishu vilivyokatwa hudumishwa kwanza kwenye halijoto ya barafu kisha hudumishwa kwa 37 0. |
| Joto | |
| Ujazo wa majaribio joto hutokea 36.5 - 37 0 | Ujazaji wa trypsinization wa baridi hutokea kwenye halijoto ya barafu. |
| Muda Unaotumika | |
| Muda mchache zaidi unaohitajika kwa mchakato mzima (takriban saa 4) za ujazo joto. | Muda mrefu zaidi unahitajika (takriban saa 6 - 24) kwa ujazo baridi. |
| Mazao ya Seli Inayotumika | |
| Jaribio la chini la joto. | Uingizaji hewa wa juu katika ubaridi. |
| Matumizi ya Centrifugation | |
| Centrifugation inahitajika kwa utenganishaji wa seli katika trypsinization joto. | Centrifugation haihitajiki katika ujazo baridi. |
| Wingi wa Awali wa Tishu kwa Kujaribu Kujaza | |
| Kiasi kikubwa zaidi cha tishu kinaweza kutumika katika ujanibishaji joto. | Kiasi kidogo zaidi cha tishu kinaweza kutumika katika ujanibishaji baridi. |
| Uharibifu wa Kiini | |
| Juu kutokana na uwekaji katikati katika ujazo joto. | Chache kwa sababu ya ujazo baridi. |
Muhtasari – Uongezaji joto dhidi ya Baridi
Trypsinization ni mbinu ya kutumia kimeng'enya cha trypsin kinachoharibu protini kwa utenganishaji na utayarishaji wa tamaduni za msingi za seli wakati wa mchakato wa ukuzaji seli. Kuna mbinu mbili kuu za trypsinization kulingana na hali ya joto iliyotumiwa wakati wa utaratibu. Wao ni joto na baridi trypsinization. Ujazaji wa trypsinization joto hufanywa saa 37 0C ilhali ujazo wa trypsinization baridi hufanywa chini ya hali ya baridi ya barafu. Ingawa trypsinization baridi huchukua muda mrefu zaidi kukamilika, inasemekana kuwa na mavuno ya juu ya seli zinazoweza kutumika. Hii ni kutokana na ukweli kwamba uharibifu wa seli hupunguzwa katika trypsinization baridi kwani haitumii hatua kali za centrifugation. Hii ndio tofauti kati ya ujazo joto na baridi.
