Tofauti Muhimu – YAC vs M13 Phage Vector
Kuunganisha kwa DNA ni mchakato muhimu unaowezesha uenezaji wa vipande muhimu vya DNA vya viumbe. Inahitaji kuunganishwa kwa DNA mahususi na DNA ya vekta ili kuunda recombinant DNA ambayo hubadilika kuwa kiumbe mwenyeji. Vekta ni molekuli ya DNA inayofanya kazi kama chombo cha kubeba chembe za kijeni za kigeni hadi kwenye seli au kiumbe kingine. Inapaswa kuwa na uwezo wa kunakili ndani ya kiumbe mwenyeji na kutoa nakala nyingi za DNA iliyounganishwa tena. Kuna aina tofauti za vekta zinazotumika katika uundaji wa DNA. Kromosomu bandia ya chachu (YAC) na vekta ya phage M13 ni aina mbili kati yao. Tofauti kuu kati ya YAC na vekta ya fagio M13 ni kwamba YAC ni kromosomu bandia ambayo hujinakili katika seli za chachu huku vekta ya M13 ni DNA moja ya duara iliyokwama ya bacteriophage M13 ambayo inajirudia katika seli za E Coli.
YaC Vector ni nini?
YAC ni kromosomu iliyotengenezwa kiholela ambayo ina uwezo wa kubeba sehemu kubwa ya DNA ya kigeni na kunakili ndani ya seli za chachu. Ina mifuatano ya centromere, telomere na kujinakilisha kwa uhuru muhimu kwa urudufishaji na uthabiti. YAC inapaswa pia kuwa na kiashirio au viashirio maalum na tovuti za vizuizi ili kuifanya iwe vekta ya uundaji wa njia bora. Mifuatano mikubwa ya kuanzia kb 1000 hadi kb 2000 inaweza kuingizwa kwenye YAC na kuhamishiwa kwenye chachu.
Kielelezo 01: YAC Vector
M13 Phage Vector ni nini?
Bacteriophage M13 ni virusi vinavyoambukiza na kujinakili katika E Coli. Genome ya bacteriophage ya M13 ni ndogo kwa ukubwa, kuhusu 6.7 kb. Ni DNA yenye ncha moja, ya duara na chanya. Virusi hivi huambukiza bakteria E Coli haswa kupitia F pilus. Mara tu inapoingia kwenye ssDNA ndani ya bakteria, huunganisha uzi wake shirikishi na kuwa dsDNA au umbo la kunakili (RF) la M13. RF inaweza kuishi kama plasmid ndani ya kiumbe mwenyeji. dsDNA inajirudia ndani ya E Coli na hutoa ssDNA yenye fagio mpya. Phaji hizi mpya hutolewa kila mara kutoka kwa E Coli bila kuua seli ya mwenyeji. Hata hivyo, maambukizi hupunguza kasi ya ukuaji wa E Coli. dsDNA inaweza kutolewa kutoka kwa seli za bakteria na kutumika kama vekta katika uundaji wa DNA. Wanajulikana kama vekta za fagio M13. Zinaweza kubadilishwa kwa urahisi na kutumika sawa na vekta za plasmid.
Uwezo wa asili wa kuambukizwa wa fagio hizi za M13 hutumika kama sifa nzuri ya kutumiwa kama kisambazaji katika uundaji wa jeni. Wakati wa kuendeleza M13 kwenye vector, vipengele kadhaa vinapaswa kuingizwa katika genome yake. Wao ni, jeni la protini ya lac repressor (lac I), eneo la opereta-proximal la jeni la lac Z, mkuzaji wa lac na tovuti ya cloning nyingi (polylinker). Wakati dsDNA ya M13 inatumiwa kama vekta, inaweza kutibiwa kama vekta ya plasmid. Hata hivyo, matumizi ya ssDNA M13 ina manufaa katika mpangilio wa DNA na mutagenesis inayoelekezwa kwenye tovuti.
Kwa kuwa vekta ya faji ya M13 huzaa tovuti nyingi za kloni katika eneo la lacZ, vekta zilizounganishwa zinaweza kutambuliwa kwa urahisi kwa uchunguzi wa koloni la bluu/nyeupe kwenye bati za agar zenye IPTG na X-Gal. Plaques za bluu zinazozalishwa kwenye sahani hazina phages zilizounganishwa. Kwa hivyo, fagio zilizo na viingilio zinaweza kuchaguliwa kwa madhumuni ya kuiga.
Kielelezo 02: Bacteriophage M13
Kuna tofauti gani kati ya YAC na M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC ni kromosomu iliyobuniwa kwa vinasaba ambayo ina uwezo wa kubeba sehemu kubwa ya DNA ya kigeni na kunakili ndani ya chembechembe za chachu. | M13 phage vekta ni vekta ya virusi iliyotengenezwa na bacteriophage M13 ambayo hutumika kuingiza DNA ya kigeni kwenye E Coli. |
| Madhumuni | |
| YAC ziliundwa ili kuunda vipande vikubwa vya DNA ya jenomu kuwa chachu. | Vekta za fagio M13 hutumika kuingiza DNA ya kigeni kwenye E Coli. |
| Ingiza Urefu | |
| YAC zinaweza kuwa na vichocheo vya jeni vya ukubwa wa megabase (kb 1000 – kb 2000). | Ukubwa wa viingilio ni takriban bps 1, 500. |
| Ujenzi | |
| YAC DNA ni vigumu kusafisha ikiwa haijakamilika na inahitaji umakini wa juu ili kuzalisha mfumo wa vekta wa YAC. | Hutokea kupitia mnyororo wa elektroni wa photosynthetic wa mzunguko. |
| Utulivu | |
| YAC si dhabiti. | feji za M13 zinaweza kutolewa kwa urahisi. |
| Ukubwa | |
| Enzymes ni molekuli kubwa zaidi. | fagio la M13 ni thabiti kuliko YAC. |
Muhtasari – YAC vs M13 Phage Vector
YAC ni mfumo wa vekta ulioundwa kwa njia ghushi kwa kutumia eneo maalum la kromosomu ya chachu ili kuingiza sehemu kubwa za nyenzo za kijeni kwenye seli za chachu. M13 phage vekta ni mfumo wa vekta unaotokana na bacteriophage M 13 ambayo hutumia E koli kama kiumbe mwenyeji. Hii ndio tofauti kuu kati ya YAC na M13 Phage Vector. Zote mbili ni muhimu kwa usawa katika teknolojia ya DNA iliyounganishwa tena na uundaji wa jeni.
