Tofauti Muhimu – Cloning vs Subcloning
Kujifunga na Kutenganisha ni taratibu za kibayolojia za molekuli ambazo huunda seli au viumbe vinavyofanana kijeni vyenye DNA au jeni ambayo ni ya kuvutia. Kuunganisha ni mbinu ambayo inahusisha kupachika jeni au DNA inayovutiwa kwenye vekta, uigaji wake ndani ya bakteria mwenyeji, na utengenezaji wa seli au viumbe ambavyo ni nakala halisi za muundo wa kijeni. Subcloning ni mbinu inayohusisha uwekaji wa jeni la kuvutia, ambalo tayari limeingizwa kwenye vekta, kwenye vekta ya pili, uigaji wake ndani ya bakteria mwenyeji, na uundaji wa nakala zinazofanana za kijeni za seli au viumbe. Tofauti kuu kati ya cloning na subcloning ni kwamba, katika cloning, jeni la riba, mara moja limefungwa ndani ya vekta, kuendelea na mchakato wa cloning wakati, katika subcloning, gene tayari cloned ya riba ni kutengwa na vector mama na kuingizwa tena ndani. vekta ya mpokeaji na uendelee na mchakato.
Cloning ni nini?
Cloning ni utaratibu ambao hutoa viumbe au seli zinazofanana kijeni. Kwa asili, cloning hutokea kwa njia ya uzazi usio na jinsia. Wakati hakuna muunganisho wa jeni au mabadiliko, chembechembe za binti hupokea muundo sawa wa kijeni wa mzazi. Viumbe vya prokariyoti na yukariyoti huunda clones kwa mgawanyiko wa binary, chipukizi, mitosisi, n.k. Katika baiolojia ya molekuli, jeni za kuiga au vipande mahususi vya DNA ni mbinu maarufu ya kuchunguza muundo na utendaji wa sehemu hiyo mahususi ya DNA.
Lengo kuu la uunganishaji wa molekuli ni kutengeneza mamilioni ya nakala za chembechembe zinazofanana kijeni au viumbe vilivyo na kipande cha DNA cha kuvutia (hasa jeni). Inaunda viumbe vyenye nakala halisi za maumbile ya mwingine. Kimsingi, jeni mahususi huundwa katika tafiti za molekuli ili kupata taarifa za kimuundo na utendaji kazi na kwa mpangilio wa DNA. Pia, kwa ajili ya utengenezaji wa protini maalum au bidhaa kwa kiwango kikubwa, cloning hutumiwa sana.
Utaratibu wa Kuunganisha
Hatua za msingi za utaratibu wa kuunda cloning ni kama ifuatavyo.
- Kutambua na kutengwa kwa jeni inayokuvutia. (Ukuzaji wa jeni la riba kwa PCR).
- Kuzuia usagaji wa Jeni ya riba (Kizuizi endonuclease kata jeni).
- Kuzuia usagaji wa DNA ya vekta. (Vekta DNA pia hukatwa kwa kutumia kizuizi sawa cha endonuclease).
- Kuingizwa kwa jeni kwenye vekta na uundaji wa molekuli recombinant.
- Mabadiliko ya vekta recombinant kuwa bakteria mwenyeji.
- Kutengwa na utambuzi wa bakteria iliyobadilishwa (vekta ya plasmid inapaswa kuwa na jeni inayoweza kuchaguliwa, mara nyingi jeni inayostahimili viua vijasumu ili kuchunguza bakteria iliyobadilishwa).
- Msemo wa jeni recombinant ndani ya seva pangishi.
Kielelezo_01: Utaratibu wa Kuunganisha
Subcloning ni nini?
Subcloni ni utaratibu wa kuhamisha jeni la kuvutia kutoka vekta moja hadi vekta nyingine ili kuona usemi wa jeni ili kupata utendakazi unaohitajika wa jeni. Kwa njia hii, vectors mbili zinahusika; yaani, vekta mzazi na vekta lengwa. Viingilio vilivyounganishwa huhamishwa tena hadi kwenye vekta ya pili katika ukandamizaji. Kusudi la kuhamisha jeni kutoka kwa vekta ya kwanza hadi vekta ya pili ni kupata kitu ambacho hakingeweza kufanywa na vekta ya kwanza au kutenganisha jeni tena ndani ya kipande cha DNA ambacho tayari kimeundwa na kuelezea peke yake. Enzymes ya kizuizi hutumiwa katika utaratibu huu mwanzoni.
Utaratibu wa Kupunguza
Hatua za msingi za ujumuishaji ni kama ifuatavyo.
- Kwa usaidizi wa kuzuia endonucleases, kutenganishwa kwa DNA ya riba katika plasmid ya wafadhili (vekta mama).
- Ukuzaji wa DNA ya kuvutia kwa kutumia PCR.
- Usafishaji wa bidhaa ya PCR (DNA ya kuvutia) kwa kutumia gel electrophoresis.
- Kufunguliwa kwa plasmid ya mpokeaji kwa kizuizi sawa na endonuclease zinazotumiwa kutenganisha DNA ya riba katika plasmid mama.
- Muunganisho wa DNA ya riba (jeni) kwenye plasmid ya mpokeaji ili kuunda plasmid ndogo.
- Mabadiliko ya vekta ndogo kuwa bakteria mwenyeji stahiki.
- Kuchunguza visanduku vilivyobadilishwa.
- Kusafisha DNA ya plasmid na matumizi ya mpangilio wa DNA au usemi wa jeni ili kupata bidhaa zinazohitajika.
Ugawanyaji unafanywa wakati wa kutenga jeni moja kutoka kwa kikundi kilichoundwa cha jeni au wakati jeni la kuvutia linapohitajika kuhamishwa hadi kwenye plasmid muhimu ili kuona utendaji kamili wa jeni la riba.
Kielelezo_02: Utaratibu wa Uundaji wa Ukloni mdogo
Kuna tofauti gani kati ya Cloning na Subcloning?
Cloning vs Subcloning |
|
| Cloning ni utaratibu ambao hutoa viumbe au seli zinazofanana kijeni. | Upunguzaji ni utaratibu wa kuhamisha jeni la kuvutia kutoka kwa vekta moja hadi vekta nyingine ili kuona usemi wa jeni ili kupata utendaji unaohitajika wa jeni. |
| Mchakato | |
| Tenganisha DNA ya kuvutia kutoka kwa viumbe na kuingizwa kwenye vekta mara moja na kutengenezwa | DNA iliyoundwa tayari inatenganishwa na vekta ya kwanza na kuingizwa kwenye vekta ya pili na kuunganishwa. |
| Ingiza Mwendo kupitia Vekta | |
| Haihamishi viingilio (DNA ya riba) kutoka vekta moja hadi vekta nyingine. | Hamisha vipengee kutoka kwa vekta kuu hadi kwenye vekta lengwa. |
Muhtasari – Cloning vs Subcloning
Cloning huunda seli au viumbe vinavyofanana kijeni vyenye jeni iliyoingizwa au DNA ya kuvutia. Huendelea kwa kutenganishwa na kuingizwa kwa DNA ya riba katika vekta na kujieleza ndani ya bakteria mwenyeji. Subcloning inashiriki hatua sawa na cloning. Hata hivyo, katika subcloning, kipande cha DNA kilichoundwa tayari (jeni la riba) huingizwa kwenye vekta na kubadilishwa kuwa bakteria mwenyeji. Hiyo ndiyo tofauti kuu kati ya cloning na subcloning.
