Tofauti Muhimu – Probe vs Primer
Kichunguzi cha molekuli ni kipande kidogo cha DNA au RNA ambacho hutambua mfuatano wa ziada katika DNA au RNA na kuruhusu utambuzi wa mfuatano unaolengwa. Primer ni sehemu ndogo ya DNA au RNA ambayo hutumika kama mahali pa kuanzia kwa usanisi wa DNA. Vianzio na vichunguzi huchanganywa na nyukleotidi za ziada za DNA ya kiolezo au DNA inayolengwa. Hata hivyo, tofauti kuu kati ya uchunguzi na kianzilishi ni kwamba vianzio ni muhimu kwa ajili ya urudufishaji wa DNA ilhali uchunguzi ni muhimu ili kugundua mfuatano maalum katika sampuli ya DNA.
Uchunguzi ni nini?
Probe ni kipande kidogo cha DNA au RNA kinachotumiwa kutambua DNA au RNA inayolengwa katika sampuli kwa mseto wa molekuli. Pia hujulikana kama alama za molekuli. Urefu wa uchunguzi unaweza kutofautiana (misingi 100 hadi 1000), na nyukleotidi za uchunguzi ni za ziada kwa sehemu ya mlolongo unaolengwa. Kwa urahisi wa ugunduzi, uchunguzi huwekwa alama na isotopu za mionzi au kwa rangi za fluorescent au kingamwili. Uchunguzi hufungamana na besi za ziada za mfuatano lengwa na huonyesha kuwepo kwa DNA au RNA inayolengwa kwenye sampuli. Kuna njia mbili kuu za uchunguzi wa lebo: mwisho wa kuweka lebo na tafsiri ya nick. Vichunguzi vimeainishwa katika aina tofauti ikiwa ni pamoja na vichunguzi vya DNA, vichunguzi vya RNA, vichunguzi vya cDNa na vichunguzi sanisi vya oligonucleotidi, na hutayarishwa kwa kutumia mbinu tofauti.
Udadisi ni zana muhimu katika maeneo mengi ya vijidudu na molekuli kama vile virusi, patholojia ya uchunguzi, uchunguzi wa baba, alama za vidole za DNA, kugundua magonjwa ya kijeni, RFLP, cytogenetics ya molekuli, mseto wa in situ, n.k.
Kielelezo 01: Kichunguzi chenye lebo ya fluorescent kinatumika katika SAMAKI kugundua vimelea vya magonjwa
Primer ni nini?
Primer ni kipande kifupi cha DNA au RNA ambacho hutumika kama mwanzilishi wa usanisi wa DNA. Kimeng'enya cha polimerasi ya DNA huongeza nyukleotidi kwenye kikundi cha 3' OH cha mfuatano wa kitangulizi na kuunganisha uzi mpya unaosaidia DNA ya kiolezo. Primers ni vipande vifupi sana na urefu wa nyukleotidi 18 hadi 20. Huunganishwa kwa kemikali kwenye maabara kwa ajili ya ukuzaji wa DNA katika vitro (PCR). Primers zinaweza kuwa na mlolongo wowote wa nyukleotidi kwa vile zimeundwa na mtumiaji. Zimeunganishwa ili kuendana na besi za ziada za kiolezo cha DNA. Kwa hiyo, inaweza kuwa na mlolongo wowote wa nucleotides. Vipimo vya msingi ni muhimu sana kwa uigaji wa DNA kwa kuwa DNA polimasi haiwezi kuunganisha DNA mpya bila kipande cha DNA kilichopo. Wakati wa kuunda vianzio vya PCR, mambo yafuatayo yanahitajika kuzingatiwa:
- Primers zinapaswa kuwa na nyukleotidi za ziada kwenye ncha ya ubavu ya DNA inayotaka kukuza.
- Primers zinapaswa kuwa na halijoto ya kuyeyuka kati ya 55 - 65 0C
- Maudhui ya G na C yanapaswa kuwa kati ya 50 hadi 60%.
Vitangulizi viwili vinatumika katika PCR kama mbele na kinyume ili kunakili viambato vyote viwili vya sampuli ya DNA. Viunzilishi hutumika kwa kawaida kutekeleza PCR na mpangilio wa DNA.
Kielelezo 02: Uwekaji wa kwanza kwenye PCR
Kuna tofauti gani kati ya Probe na Primer?
Probe vs Primer |
|
| Chunguza ni kipande kidogo cha DNA/RNA kinachotumiwa kutambua kuwepo kwa mfuatano lengwa katika sampuli kwa mseto wa molekuli. | Primer ni sehemu ndogo ya DNA au RNA ambayo hutumika kama kianzio cha urudufishaji wa DNA. |
| Function | |
| Hii hutambua kuwepo kwa mfuatano mahususi katika sampuli ya DNA au RNA. | Hii ni sehemu ya kuanzia kwa usanisi wa DNA. |
| Urefu | |
| Urefu unaweza kuwa kati ya besi 100 - 1000 | Urefu kwa ujumla ni takriban besi 18 - 20 |
| Kufunga kwa Mfuatano Kamilishi | |
| Udadisi huchanganya kwa misingi inayosaidiana ya mfuatano lengwa | Michanganyiko ya awali yenye misingi ya ziada ya nyuzi za DNA. |
| Kuweka lebo | |
| Uchunguzi umewekwa lebo kwa urahisi wa kutambuliwa | Primers kwa ujumla hazina lebo |
| Tumia katika PCR | |
| Vichunguzi havitumiki katika PCR | Primers hutumika kwenye PCR |
Muhtasari – Probe vs Primer
Chunguza ni kipande kidogo cha mfuatano wa DNA au RNA ambacho kinaweza kuchanganywa kwa nyukleotidi za ziada ili kutambua mfuatano lengwa katika sampuli. Vichunguzi huwa na lebo ya mionzi, immunological au fluorescent ili kuona uwepo wa mlolongo lengwa. Primer ni kipande kidogo sana cha DNA au RNA ambacho hufanya kama mahali pa kuanzia kwa ukuzaji wa DNA katika vitro. DNA polimasi hutambua kianzilishi cha kikundi cha 3’ OH na kuanzisha ujenzi wa uzi mpya unaosaidiana na kiolezo. Vichunguzi na vianzio hufanya kazi vivyo hivyo kwa kuchanganya na nyukleotidi za ziada. Kwa hivyo, tofauti kuu kati ya probe na primer ni kazi yao kuu.
