Tofauti Muhimu – Ukurasa wa SDS dhidi ya Ukurasa Asilia
SDS na ukurasa asili ni aina mbili za mbinu za elektrophoresis za jeli ya polyacrylamide zinazotumiwa katika Biolojia ya Molekuli. Tofauti kuu kati ya Ukurasa wa SDS na Ukurasa wa Asili ni aina ya jeli ya Polyacrylamide inayotumiwa. Katika Ukurasa wa SDS gel ya denaturing hutumiwa kwa hiyo, molekuli hutenganishwa kulingana na uzito wao wa molekuli. Kinyume chake, katika Ukurasa wa asili, gel zisizo za denaturing hutumiwa. Kwa hivyo, molekuli hutenganishwa kulingana na saizi yao, chaji na umbo.
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Ukurasa) hutumia jeli iliyotengenezwa kwa kupolimisha monoma za acrylamide na methylene bisacrylamide. Polyacrylamide ni kali na ina uwezo wa kustahimili joto zaidi kuliko agarose. Geli za Polyacrylamide zina ukubwa mdogo wa pore ambao huwezesha mgawanyo mzuri wa protini. Kuna aina mbili kuu za usanidi wa Ukurasa ambazo ni Ukurasa wa SDS na Ukurasa wa asili. Ukurasa wa SDS au Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel electrophoresis hutenganisha protini kulingana na uzito wa molekuli. Geli za denaturing hutumiwa katika Ukurasa wa SDS. Native Page hutumia jeli zisizo na denaturing na hutenganisha protini kulingana na ukubwa wao, chaji na umbo (muundo wa 3D).
Ukurasa wa SDS ni nini?
Ukurasa wa SDS ndiyo mbinu ya kawaida ya kielektroniki inayotumiwa kutenganisha protini kulingana na uzito wa molekuli. Gel hutengenezwa kwa kuongeza SDS (Sodium dodecyl sulfate), ambayo ni sabuni. SDS hutengeneza protini kuwa monoma. SDS ni sabuni ya anionic. Kwa hivyo, huongeza malipo hasi kwa protini ndani ya anuwai ya pH. Wakati malipo hasi ya wavu yanapotolewa kwenye molekuli za protini, kutokana na tofauti ya malipo, miundo tata imevunjwa. Kwa sababu ya malipo hasi, protini huvutia kuelekea mwisho mzuri. Kwa hivyo molekuli zilizo na uzito wa chini wa molekuli husafiri haraka kwenye tumbo la jeli na zinaweza kuangaliwa karibu na anodi, ilhali protini zenye uzito wa juu wa molekuli huzingatiwa karibu na visima.
Kielelezo 01: Ukurasa wa SDS
SDS inayofungamana na mnyororo wa polipeptidi inalingana na molekuli yake ya jamaa. Kwa hiyo, molekuli ya molekuli inaweza pia kuamua kupitia Ukurasa wa SDS. Madoa ya jeli ya Ukurasa wa SDS hufanywa na rangi ya bluu ya bromophenol. Utumizi wa ukurasa wa SDS hutofautiana kwa kiwango kikubwa ambapo inaweza kutumika kukadiria wingi wa molekuli na kubainisha wingi wa protini katika mchanganyiko wa protini. Ukurasa wa SDS pia unaweza kutumika kubainisha usambazaji wa protini katika mchanganyiko wa protini. Ukurasa wa SDS pia unatumika kusafisha na kutathmini protini. Inatumika kama utaratibu wa awali wa ukaushaji na mseto wa kimagharibi, ambao nao hutumika kwa ramani ya protini na utambulisho.
Ukurasa Asilia ni nini?
Geli ya Asili ya Polyacrylamide elektrophoresis (Ukurasa wa Asilia) hutumia jeli isiyo na denaturing. Kwa hivyo, SDS au wakala mwingine wowote wa denaturing hauongezwe kwenye tumbo la gel. Katika Ukurasa wa Asili, mgawanyo wa protini unategemea chaji na saizi ya protini. Kwa hivyo, uhamaji wa protini hutegemea chaji na ukubwa wa protini.
Chaji ya protini inategemea minyororo ya kando ya asidi ya amino. Ikiwa minyororo ya upande imeshtakiwa vibaya, protini itapokea malipo hasi kwa ujumla na kinyume chake. Protini huhifadhi muundo wa 3D kwa sababu ya mkunjo unaofanyika. Kukunja hutokana na aina kadhaa za dhamana katika protini kama vile bondi za disulfidi, mwingiliano wa haidrofobu na bondi za haidrojeni. Kwa hivyo, ikiwa Ukurasa asili unabebwa kwa pH ya upande wowote, protini zitatenganishwa kulingana na umbo la molekuli ya protini. Kwa hivyo, Ukurasa wa Asili unaweza kutumika kama mbinu nyeti ya kugundua mabadiliko ya chaji au muundo wa protini.
Faida kuu ya Ukurasa asili ni kwamba protini inayotumika kwa uchanganuzi wa Ukurasa inaweza kurejeshwa katika hali yake ya asili baada ya uchanganuzi wa Ukurasa, kwani protini haisumbui wakati wa mchakato. Native Page ni mbinu ya juu kiasi ya kusambaza, na uthabiti wa protini huongezeka.
Kielelezo 02: Ukurasa Asilia
Baada ya kukamilika kwa jeli, jeli ya Ukurasa wa Native inaweza kutazamwa kwa kutia rangi ya samawati ya bromophenol au kitendanishi kingine chochote kinachofaa. Matumizi ya Ukurasa wa Asilia ni pamoja na utenganishaji wa protini zenye asidi ikiwa ni pamoja na glycoproteini kama vile erithropoietin ya binadamu au utambuzi wa protini zilizopo kwenye Seramu ya Bovine Albumin (BSA).
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Ukurasa wa SDS na Ukurasa Asilia?
- Mifumo yote miwili ya Ukurasa wa SDS na Ukurasa wa Asilia hutumia jeli ya Polyacrylamide kama kiini cha jeli.
- Zote mbili hutumika kutenganisha na kutambua protini.
- Zote mbili hutumia uhamaji wa kielektroniki kutenganisha misombo.
- Zote mbili zinaweza kufanywa kwa njia ya wima au mlalo (mara nyingi hufanywa kama usanidi wa Ukurasa wa wima kwa sababu urefu wa kukimbia ni zaidi).
- Kifaa cha electrophoresis ikijumuisha tanki la gel, masega, usambazaji wa nishati inahitajika kwa ajili ya uendeshaji wa mbinu zote mbili.
- Kuonekana kwa jeli kunaweza kufanywa kwa mbinu za kutia madoa katika mbinu zote mbili.
Kuna tofauti gani kati ya Ukurasa wa SDS na Ukurasa Asilia?
Ukurasa wa SDS dhidi ya Ukurasa Asilia |
|
| Ukurasa wa SDS au Ukurasa wa sulfate ya Sodium-dodecyl hutenganisha protini kulingana na uzito wa molekuli, na hutumia jeli ya kugeuza. | Ukurasa asilia hutumia jeli zisizo na chembechembe na hutenganisha protini kulingana na saizi yao, chaji na umbo (muundo wa 3D). |
| Aina ya Gel | |
| Jeli ya denaturing inatumika katika ukurasa wa SDS. | Jeli isiyo ya - denaturing inatumika katika ukurasa asili. |
| Uwepo wa SDS | |
| SDS ipo kama sabuni ili kutoa malipo hasi kwenye sampuli katika ukurasa wa SDS. | SDS haipo katika ukurasa asili. |
| Misingi ya Kutengana | |
| Mgawanyo wa protini hutegemea uzito wa molekuli ya protini katika ukurasa wa SDS. | Kutengana kunategemea saizi na umbo la molekuli ya protini katika ukurasa asili. |
| Uthabiti wa Protini | |
| Uthabiti wa protini uko chini katika ukurasa wa SDS. | Uthabiti wa protini uko juu katika ukurasa asili. |
| Kupona kwa Protini Asili | |
| Haiwezekani kwa vile imeonyeshwa katika ukurasa wa SDS. | Inawezekana kwenye ukurasa asili. |
Muhtasari – Ukurasa wa SDS dhidi ya Ukurasa Asilia
Ukurasa wa SDS na Ukurasa Asilia ni aina mbili za mbinu za elektrophoresis za jeli ya Polyacrylamide zinazotumiwa kutenganisha protini. Ukurasa wa SDS hutibiwa kwa sabuni inayoitwa SDS. SDS hutoa malipo hasi kwa jumla kwa protini, ambayo husababisha kubadilika kwa protini. Kwa hiyo, protini hutenganishwa kulingana na uzito wao wa Masi. Kinyume chake, mbinu ya Ukurasa wa Asilia haitumii wakala wowote wa kutoa denaturing. Kwa hivyo protini hutenganishwa kulingana na saizi yao au umbo. Hii ndio tofauti kati ya ukurasa wa SDS na ukurasa asili.
