Tofauti Muhimu – Ukurasa wa SDS dhidi ya Western Blot
Ukaushaji wa Magharibi ni mbinu ambayo hutambua protini mahususi kutoka kwa sampuli ya protini. Mbinu hii inafanywa kupitia hatua kadhaa muhimu: electrophoresis ya gel, blotting, na mseto. Sodiamu dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Ukurasa) ni aina ya mbinu ya gel electrophoresis ambayo hutumiwa kutenganisha protini kulingana na ukubwa wao (uzito wa molekuli). Western blot ni laha maalum la utando unaofuta ambao hutumika kuhamisha muundo sawa wa protini kwenye Ukurasa wa SDS. Tofauti kuu kati ya Ukurasa wa SDS na blot ya magharibi ni kwamba Ukurasa wa SDS unaruhusu utenganisho wa protini katika mchanganyiko wakati blot ya magharibi inaruhusu ugunduzi na upimaji wa protini maalum kutoka kwa mchanganyiko. Zote ni muhimu katika tafiti za uchanganuzi wa protini.
Ukurasa wa SDS ni nini?
Ukurasa wa SDS ni mbinu ya gel electrophoresis inayotumika kutenganisha protini. Inatumika sana katika biokemia, genetics, forensics na biolojia ya molekuli. Protini zinapotolewa kutoka kwa sampuli, huendeshwa kwa jeli inayoundwa na SDS na Polyacrylamide. SDS ni sabuni ya anionic ambayo hutumiwa kupanga protini (protini za asili) na kutoa malipo hasi kwa protini zilizowekwa mstari sawia na molekuli yao ya molekuli. Polyacrylamide inakuwa tegemeo thabiti kwa jeli. Protini ambazo zimechajiwa hasi huhamia mwisho mzuri wa kifaa kupitia gel. Kulingana na saizi ya protini, kasi ya uhamiaji hutofautiana kati ya protini na utengano hufanyika. Kwa hivyo, ukurasa wa SDS ni muhimu kwa mgawanyo wa protini mahususi kulingana na saizi zao.
Utayarishaji wa jeli ya Polyacrylamide kwa mgawanyo wa protini ni hatua muhimu katika Ukurasa wa SDS. Mkusanyiko sahihi wa Polyacrylamide na aina ya wakala wa kuunganisha msalaba unaotumiwa huathiri sana mali ya kimwili ya gel, ambayo inafanya mgawanyiko halisi wa protini tofauti. Ukubwa wa pore wa gel unapaswa kusimamiwa vizuri kwa kujitenga kwa ufanisi. Hata hivyo, Ukurasa wa SDS unachukuliwa kuwa mbinu ya utengano wa protini yenye msongo wa juu.
Mbinu ya SDS Ukurasa ina kizuizi kikubwa katika uchanganuzi wa protini. Kwa kuwa SDS hubadilisha protini kabla ya kutenganishwa, hairuhusu ugunduzi wa shughuli za enzymatic, mwingiliano wa kufunga protini, viambatanisho vya protini, n.k.
Kielelezo 01: Ukurasa wa SDS
Western Blot ni nini?
Mbinu ya ukaushaji wa Magharibi huwezesha ugunduzi wa protini mahususi kutoka kwa mchanganyiko wa protini na kupima wingi na uzito wa molekuli ya protini. Waa la Magharibi ni utando unaotumiwa wakati wa kufutwa ili kupata taswira ya kioo ya muundo wa protini katika jeli ya SDS- Polyacrylamide. Utando unaotumika kwa ukaushaji wa kimagharibi hutengenezwa zaidi na nitrocellulose au polyvinylidene difluoride (PVDF). Utando wenye protini iliyohamishwa unaweza kutumika kutambua protini inayotakiwa. Inahitaji kingamwili ya hali ya juu ili kugundua protini inayotakikana kwa mseto. Kingamwili hujifunga kwa antijeni yake mahususi na kufichua uwepo wa antijeni inayotakikana ambayo ni protini.
Uhamisho wa protini kutoka kwa jeli ya SDS Polyacrylamide hadi bloti ya magharibi hufanywa kwa kuzuia umeme. Ni njia nzuri na ya haraka ambayo husababisha protini kutoa elektrophore kutoka kwenye jeli na kupita kwenye utando wa nitrocellulose (western blot).
Kielelezo 02: Western Blot
Kuna tofauti gani kati ya Ukurasa wa SDS na Western Blot?
Ukurasa waSDS dhidi ya Western Blot |
|
| Ukurasa wa SDS ni mbinu ya gel electrophoresis. | Western blot ni mbinu ambayo hufanywa kwenye utando ili kugundua protini mahususi kutoka kwa mchanganyiko. |
| Tumia | |
| Ukurasa wa SDS huruhusu utenganishaji wa protini kulingana na saizi zao. | Blati ya Magharibi huruhusu uhamishaji wa protini kwenye jeli ya ukurasa wa SDS bila kubadilisha muundo wake na inaruhusu mseto kwa kingamwili mahususi. |
| Hasara | |
| Upungufu wa protini, gharama ya juu, na uwepo wa kemikali za neurotoxin ni hasara za mbinu hii. | Mbinu hii inatumia muda na inahitaji hali nzuri ya kibinafsi yenye uzoefu na kudhibitiwa. |
Muhtasari – Ukurasa wa SDS dhidi ya Western Blot
Ukurasa wa SDS na blot ya magharibi ni mbinu mbili zinazohusika katika uchanganuzi wa protini. Ukurasa wa SDS huruhusu mgawanyo rahisi wa protini kwenye jeli kulingana na uzito wao wa Masi. Western blot husaidia kuthibitisha uwepo na wingi wa protini mahususi kupitia mseto na kingamwili mahususi. Hii ndio tofauti kati ya Ukurasa wa SDS na western blot.
