Tofauti Muhimu – DNA dhidi ya Uchimbaji wa RNA
Utafiti wa DNA na RNA ni vipengele muhimu ili kuelewa dhana za kimsingi za baiolojia ya molekuli, bioteknolojia na jenetiki. Uchimbaji wa sampuli safi za DNA na RNA ni muhimu ili kutekeleza taratibu za majaribio wakati wa masomo haya. Tofauti kuu kati ya uchimbaji wa DNA na RNA ni kwamba mchakato wa uchimbaji wa DNA husafisha DNA wakati uchimbaji wa RNA husafisha RNA. Mchakato wa uchimbaji wa DNA una hatua tatu tofauti: uchanganuzi wa seli na ukataboli wa lipids na protini za membrane, kukusanyika kwa catabolites na mmumunyo wa chumvi iliyokolea na uwekaji wa DNA na ethanoli. Utaratibu wa hatua tatu unaweza kuwa na hatua mbili za hiari. Mchakato wa utakaso wa RNA una hatua nne tofauti: kuongezwa kwa guanidium thiocyanate kwa ajili ya uchanganuzi wa seli, utengano wa protini ikiwa ni pamoja na ribonucleases, kutenganisha RNA kwa kuongezwa kwa klorofomu na phenoli na kuosha mvua kwa kutumia ethanoli.
Uchimbaji wa DNA ni nini?
Uchimbaji wa DNA ni mchakato halisi na wa kemikali ambao hutumika kusafisha DNA kutoka kwa sampuli. Uchimbaji wa DNA ni kipengele muhimu katika muktadha wa biolojia ya molekuli na sayansi ya uchunguzi. Mchakato huo ni wa hatua tatu za msingi. Awali, seli za riba zinapaswa kupatikana. Kisha, lysis ya seli inawezeshwa ili kuvunja utando wa seli, ambayo hufungua seli na kufichua saitoplazimu pamoja na DNA. Viyoyozi au sabuni zingine zinaweza kutumika kusambaza lipids kutoka kwa utando wa seli huku protini zilizopo zikichochewa na proteni. Hii ni hatua ya hiari. Mara seli inapowekwa lysed, kuunganisha kwa molekuli zilizochochewa huwezeshwa na miyeyusho ya chumvi iliyokolea. Inafuatiwa na centrifugation ya ufumbuzi ambayo hutenganisha makundi ya uchafu kutoka kwa DNA. Katika hatua hii, DNA tofauti huchanganywa na vitendanishi na chumvi zinazotumiwa wakati wa mzunguko wa seli.
Kielelezo 01: Uchimbaji wa DNA
Ili kuitakasa zaidi, hatua zifuatazo zinaweza kutumika. Njia moja ni kunyesha kwa ethanoli, ambayo inahusisha kuchanganya ethanoli ya barafu na sampuli ya DNA iliyotenganishwa. DNA haiwezi kuyeyushwa katika pombe na hivyo kuzalisha pellet kutokana na mkusanyiko wa molekuli za DNA pamoja. Acetate ya sodiamu huongezwa katika mchakato huu ili kuongeza kiwango cha mvua kwa kuongeza nguvu ya ioni. Kando na mchakato wa kunyesha kwa ethanoli, mchakato wa uchimbaji wa phenol-chloroform pia unaweza kushawishiwa kwa hili. Kwa njia hii, phenoli hubadilisha protini zilizopo kwenye sampuli. Mara tu zimewekwa katikati, protini zisizo na asili zitasalia katika awamu ya kikaboni huku molekuli za DNA ambazo zimechanganywa na klorofomu zitakuwepo katika awamu ya maji. Chloroform itaondoa mabaki ya phenoli. Uchimbaji unapokamilika, DNA huwekwa ikiwa imeyeyushwa katika bafa ya TE au maji safi zaidi.
Uchimbaji wa RNA ni nini?
Usafishaji wa RNA ni mchakato ambao RNA husafishwa kutoka kwa sampuli ya kibayolojia. Kutokana na kuwepo kwa ribonuclease katika seli na tishu, mchakato huu ni ngumu. Enzyme ya Ribonuclease ina uwezo wa kuharibu RNA haraka. Asili ya kemikali ya ribonucleases ni thabiti sana, na ni ngumu kuzima. Kupunguza ribonucleases ni chaguo. Kwa kuwa kimeng'enya hiki kinapatikana kila mahali katika seli na tishu, mbinu maalum hutengenezwa kwa uchimbaji wa RNA. Kati ya mbinu nyingi, mbinu ya kawaida ni uchimbaji wa Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform.
Kielelezo 02: Uchimbaji wa RNA
Njia ya uchimbaji ya Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform inategemea uwekaji katikati na utengano wa awamu. Mchanganyiko unaopaswa kuwekwa katikati hujumuisha sampuli ya maji na myeyusho uliojaa maji unaojumuisha phenoli na klorofomu. Mara baada ya katikati, suluhisho lina awamu ya juu ya maji na awamu ya chini ya kikaboni chini ya hali ya pH ya neutral (pH 7-8). RNA iko katika awamu ya maji. Awamu ya kikaboni kwa kawaida huwa na protini zilizoyeyushwa katika phenoli na lipids iliyoyeyushwa katika klorofomu. Wakala wa chaotropic (molekuli ambayo ina uwezo wa kuvunja vifungo vya hidrojeni kati ya molekuli ya maji) huongezwa; hii inajulikana kama, guanidinium thiocyanate. Wakala huyu ana uwezo wa kubadilisha protini ambazo ni pamoja na ribonucleases ambazo zinaweza kuharibu RNA na huhusika katika uchanganuzi wa seli. Pia hutenganisha rRNA kutoka kwa protini za ribosomal. Hatua ya mwisho ya utakaso wa RNA ni kuosha mvua ya awamu ya maji na ethanol. RNA pia inaweza kusafishwa kwa kutumia nitrojeni kioevu.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya DNA na Uchimbaji wa RNA?
- Michakato yote miwili ya uchimbaji hutumia kemikali hatari kama vile phenoli na klorofomu.
- Centrifugation ni mbinu muhimu kwa michakato yote miwili.
- Ethanoli hutumika kuosha mvua na kupata DNA au RNA iliyosafishwa.
Kuna tofauti gani kati ya DNA na Uchimbaji wa RNA?
DNA dhidi ya uchimbaji wa RNA |
|
| Uchimbaji wa DNA ni mchakato ambao hutoa DNA kutoka kwa kiumbe au sampuli. | Uchimbaji wa RNA ni mchakato ambao hutoa RNA kutoka kwa sampuli. |
| Hatua | |
| Mchakato wa uchimbaji wa DNA unajumuisha hatua tatu tofauti zenye hatua mbili za hiari. | Mchakato wa uchimbaji wa RNA unajumuisha hatua nne tofauti. |
| Vitendanishi | |
| Vifaa vya ziada, proteni (si lazima), pombe, klorofomu, phenoli, acetate ya sodiamu hutumika kwa uchimbaji wa DNA. | Guanidium thiocyanate, klorofomu, phenoli, ethanoli hutumika kwa uchimbaji wa RNA. |
Muhtasari – DNA dhidi ya Uchimbaji wa RNA
Uchimbaji wa DNA na RNA ni vipengele muhimu vya taratibu za majaribio za utafiti wa baiolojia ya molekuli, jenetiki na teknolojia ya kibayolojia. Michakato yote miwili inahusisha vitendanishi sawa, lakini uchimbaji wa RNA hutumia kitendanishi maalum kinachojulikana kama Guanidium thiocyanate ambayo hupunguza shughuli ya ribonucleases. Hii ndiyo tofauti kuu kati ya DNA na uchimbaji wa RNA.
Pakua Toleo la PDF la DNA dhidi ya Uchimbaji wa RNA
Unaweza kupakua toleo la PDF la makala haya na uitumie kwa madhumuni ya nje ya mtandao kulingana na dokezo la manukuu. Tafadhali pakua toleo la PDF hapa Tofauti Kati ya DNA na Uchimbaji wa RNA
