Tofauti kuu kati ya uchanganuzi wa nyuklia na kometi ni kwamba upimaji wa kromosomu ni muhimu ili kuangalia uharibifu wa kromosomu kama matokeo ya kukabiliwa na mutajeni, huku uchunguzi wa kometi ni muhimu kugundua uharibifu wa msingi wa DNA katika seli moja moja.
Vipimo vya sumu ya jeni husaidia kutathmini uwezekano wa mabadiliko na kasoro za kromosomu. Genotoxins ni pamoja na vitu vya kemikali na mionzi. Kansa, mutajeni, na teratojeni ni kategoria kuu za sumu za genotoksini. Husababisha uharibifu mbalimbali kama vile mabadiliko ya nukta, ufutaji, mapumziko ya nyuzi moja na mbili, mtengano wa kromosomu, uundaji wa nyuklia, urekebishaji wa DNA, na mwingiliano wa mzunguko wa seli. Hali kama hizo zinaweza kusababisha magonjwa anuwai, na majaribio ya sumu ya genotoxic huzuia uharibifu unaowezekana kutoka kwa hali hizi. Upimaji wa nyuklia ndogo na upimaji wa comet ni mbinu mbili chini ya majaribio ya sumu ya jeni.
Micronucleus Assay ni nini?
Kipimo cha Mikronucleus ni kipimo cha kutathmini uharibifu wa kromosomu kama tokeo la kukabiliwa na mutajeni. Ni muhimu katika uchunguzi wa kemikali zinazosababisha malezi ya spindle na micronuclei. Uchunguzi wa micronucleus hutoa habari juu ya uthabiti wa kemikali wakati unaingilia muundo na kazi ya kromosomu. Viini vingi vya kansa hupima chanya katika majaribio ya mikronucleus. Mchakato wa kupima unahusisha matibabu ya kemikali na kupima mzunguko wa seli za micronucleated. Iwapo kuna ongezeko lisilo la kawaida la idadi ya seli ndogo ndogo, inahitimisha kuwa kemikali hiyo husababisha uharibifu wa kromosomu.
Kipimo cha nyuklia kwa kawaida hufanywa kwa kugawanya seli kikamilifu. Kwa hivyo, seli nyekundu za damu na seli za shina za uboho zinazozalishwa kupitia mgawanyiko wa seli ni watahiniwa bora wa majaribio kama haya. Wanapata mauzo ya mara kwa mara na ya haraka. Kwa kuwa erithrositi hazina viini vya kweli, hufanya seli zenye nyuklea zionekane zaidi mwishoni mwa kipimo.
Kielelezo 01: Uchunguzi wa Uchunguzi wa Micronucleus
Majaribio ya Mikronucleus ni ya kiuchumi, ya haraka, rahisi na yanahitaji ujuzi mdogo ili kutekelezwa. Huakisi mtengano wa kromosomu kwa haraka kwa njia ya kuaminika na ni muhimu sana kutathmini uharibifu wa kromosomu haraka. Aina maalum na yenye matumizi mengi ya upimaji wa mikronucleus ni kipimo cha cytokinesis block micronucleus cytome (CBMNcyt). Ni kipimo kinachofaa zaidi kupima uharibifu wa kromosomu na ukosefu wa uthabiti katika seli. Hata hivyo, tatizo kuu la kutumia uchunguzi wa micronucleus ni kwamba haiwezi kuamua aina tofauti za kutofautiana kwa kromosomu, na uchambuzi una ushawishi juu ya kiwango cha mitotic na uwiano wa kifo cha seli, na kusababisha matokeo kubadilika.
Comet Assay ni nini?
Assay ya Comet, ambayo pia inajulikana kama upimaji wa gel moja ya electrophoresis, ni mbinu rahisi na nyeti ya kugundua uharibifu wa DNA. Hupima mwanya wa DNA katika seli za yukariyoti na ni mbinu ya kawaida ya uchunguzi wa kibayolojia na upimaji wa sumu ya jeni.
Kipimo cha kometi kinahusika katika uwekaji wa seli katika kusimamishwa kwa kiwango cha chini cha myeyuko wa agarose, uchanganuzi wa seli katika hali ya upande wowote au ya alkali, na elektrophoresis ya seli zilizosimamishwa. Wakati wa mchakato wa kuingizwa, seli husimamishwa katika agarose ya kiwango cha chini cha kuyeyuka, na agarose huunda tumbo la nyuzi za kabohaidreti ili kuziweka mahali pake. Agarose haina upande wa osmotically; kwa hiyo, inawezesha ufumbuzi wa kupenya kupitia gel na kuathiri seli bila kuvuruga na kuhamisha. Suluhisho la lysis ni suluhisho la chumvi yenye maji iliyojilimbikizia sana na sabuni. Chumvi hii huvuruga protini na mifumo ya kuunganisha ndani ya seli huku ikivuruga maudhui ya RNA ya seli. Seli huharibu, na protini zote, RNA, viambajengo vya cytoplasmic na nucleoplasmic, huvuruga na kusambaa kwenye tumbo la agarose, na kuacha DNA.
Kielelezo 02: Comet Assay
Myeyusho wa electrophoresis ni myeyusho wa alkali ambapo DNA ya helix mbili hubadilika na kuwa na ncha moja. Wakati wa mchakato huu, uwanja wa umeme hutumiwa kuchambua picha. Uchanganuzi wa picha hupima ukubwa wa jumla wa fluorescence kwa DNA na nucleoid na kulinganisha hizi mbili. Muundo wa jumla unafanana na comet yenye kichwa cha mviringo kinachofanana na DNA iliyobaki isiyoharibika na mkia kwa DNA iliyoharibiwa. Kadiri mkia unavyong'aa na mrefu kutokana na ishara kali, ndivyo kiwango cha uharibifu kinavyoongezeka.
Nini Zinazofanana Kati ya Micronucleus na Comet Assay?
- Micronucleus na comet assay ni ya kiuchumi, haraka, rahisi, na inahitaji ujuzi mdogo.
- Hufanywa hasa kwenye DNA.
- Majaribio yote mawili husaidia kutathmini mabadiliko na upungufu wa kromosomu.
- Aidha, mbinu zote mbili hutumia kemikali kutekeleza utaratibu.
Nini Tofauti Kati ya Micronucleus na Comet Assay?
Kipimo cha nyuklia ni muhimu katika kuangalia uharibifu wa kromosomu kama tokeo la kukabiliwa na mutajeni, ilhali uchunguzi wa kometi ni muhimu katika kugundua uharibifu msingi wa DNA katika seli mahususi. Kwa hivyo, hii ndiyo tofauti kuu kati ya micronucleus na comet assay. Pia, uchunguzi wa micronucleus umeanzishwa vizuri ili kuchunguza clastogenicity na aneugenicity. Kipimo cha kometi kinatumika kama mtihani wa sumu ya jeni ili kugundua uharibifu wa msingi wa DNA katika seli. Zaidi ya hayo, uchunguzi wa micronucleus hutoa habari juu ya utulivu wa kemikali, wakati uchunguzi wa comet ni electrophoresis ya gel moja ya seli.
Infographic hapa chini inawasilisha tofauti kati ya micronucleus na comet assay katika umbo la jedwali kwa ulinganishi wa ubavu.
Muhtasari – Micronucleus vs Comet Assay
Vipimo vya sumu ya jeni husaidia kutathmini uwezekano wa mabadiliko na kasoro za kromosomu. Uchunguzi wa micronucleus na assay comet ni mbinu mbili chini ya majaribio ya genotoxicity. Upimaji wa nyuklia ndogo hutathmini uharibifu wa kromosomu kama tokeo la mfiduo wa mutajeni. Uchunguzi wa Comet ni mbinu rahisi na nyeti ya kugundua uharibifu wa DNA. Kwa hiyo, hii ndiyo tofauti kuu kati ya micronucleus na comet assay. Uchunguzi wa micronucleus ni muhimu katika uchunguzi wa kemikali zinazosababisha uundaji wa spindle na micronuclei. Kipimo cha kometi kinahusika katika uwekaji wa seli katika kusimamishwa kwa kiwango cha chini cha myeyuko wa agarose, uchanganuzi wa seli katika hali ya neutral au alkali, na electrophoresis ya seli zilizosimamishwa.
