Tofauti kuu kati ya mtihani wa BCA na Bradford ni kwamba upimaji wa BCA unatumia wakati na sio sahihi, ilhali ukadiriaji wa Bradford ni wa haraka na sahihi.
BCA na Bradford assay ni mbinu mbili za kupima ukolezi wa protini. Vipimo hivi viwili vina kanuni tofauti za upimaji na tofauti katika usahihi wake.
BCA Assay ni nini?
Kipimo cha BCA au kipimo cha asidi ya bicinchoniniki ni kipimo cha kibayolojia ambacho ni muhimu katika kubainisha mkusanyiko wa jumla wa protini katika suluhu. Njia hii pia inaitwa assay ya Smith baada ya mvumbuzi wake, Paul K. Smith. Njia hii ya uchanganuzi inaonyesha ufanano na upimaji wa protini wa Lowry, mtihani wa protini wa Bradford au reagent ya biuret. Tunaweza kuchunguza mkusanyiko wa jumla wa protini katika sampuli fulani kupitia mabadiliko ya rangi ya sampuli ya myeyusho, ambayo huenda kutoka kijani hadi zambarau. Mabadiliko haya ya rangi hutokea kwa uwiano wa maudhui ya protini. Baada ya hapo tunaweza kutumia mbinu ya rangi kuchanganua ukubwa wa rangi na maudhui ya protini kwenye sampuli.
BCA Mbinu ya Kukadiria Protini
Unapozingatia utaratibu wa upimaji wa BCA, myeyusho wa kawaida wa BCA una myeyusho wa alkali nyingi wenye pH ya takriban 11.25, na viambato katika myeyusho huu ni pamoja na asidi ya bicinchoniniki, kabonati ya sodiamu, bicarbonate ya sodiamu, tartrate ya sodiamu na shaba(II) pentahydrate ya salfati. Mchanganuo huu kimsingi unategemea athari mbili za kemikali: kupunguzwa kwa shaba(II) hadi shaba(I) kwa vifungo vya peptidi katika protini na chelation ya molekuli mbili za asidi ya bicinchoniniki na ioni ya shaba(I), na kusababisha mchanganyiko wa rangi ya zambarau. kunyonya mwanga kwa urefu wa 562 nm. Katika majibu ya kwanza, kiasi cha shaba(II) kilichopunguzwa na vifungo vya peptidi ni sawia na kiasi cha protini katika sampuli.
Bradford Assay ni nini?
Mchanganuo wa Bradford ni mbinu ya uchanganuzi inayotumika sana katika kupima mkusanyiko wa protini katika suluhu. Mbinu hii ilitengenezwa na Marion M. Bradford mwaka wa 1976, na ni mbinu ya haraka na sahihi ukilinganisha.
Mtikio wa Rangi wa Protini na Kitendanishi cha Bradford
Tunaweza kutumia mbinu hii kubaini mkusanyiko wa kiasi cha protini katika sampuli. Mwitikio wa kemikali unaofanyika katika sampuli wakati wa jaribio hili unategemea tu muundo wa asidi ya amino ya protini katika sampuli.
Njia ya Bradford ya Kukadiria Protini
Unapozingatia mbinu ya upimaji huu, ni upimaji wa protini ya rangi ambayo inategemea mabadiliko ya ufyonzaji wa rangi inayoitwa Coomassie Brilliant Blue G-250. Kwa ujumla, rangi hii inapatikana katika aina tatu kama umbo la anionic (bluu), umbo la upande wowote (kijani) na umbo la cationic (nyekundu). Kwa hiyo, chini ya hali ya tindikali, rangi hubadilisha rangi yake kutoka nyekundu hadi bluu. Hii ni kwa sababu ya kushikamana kwa protini na rangi. Kwa kulinganisha, ikiwa hakuna protini ya kumfunga na rangi, mabadiliko ya rangi haionekani, suluhisho hupata rangi nyekundu-kahawia. Rangi hii ina uwezo wa kutengeneza mchanganyiko thabiti na usio na ushirikiano na kundi la kaboksili la protini kupitia nguvu za Van der Waal na vivutio vya kielektroniki.
Nini Tofauti Kati ya BCA na Bradford Assay?
BCA na Bradford assay ni mbinu mbili za kupima ukolezi wa protini. Vipimo hivi viwili vina kanuni tofauti za upimaji na tofauti katika usahihi wake. Tofauti kuu kati ya majaribio ya BCA na Bradford ni kwamba uchanganuzi wa BCA unatumia wakati na sio sahihi, ilhali ukadiriaji wa Bradford ni wa haraka na sahihi.
Infographic ifuatayo ni muhtasari wa tofauti kati ya BCA na Bradford assay katika muundo wa jedwali.
Muhtasari – BCA vs Bradford Assay
Kipimo cha BCA au kipimo cha asidi ya bicinchoniniki ni kipimo cha kibayolojia ambacho ni muhimu katika kubainisha mkusanyiko wa jumla wa protini katika suluhu. Uchanganuzi wa Bradford ni njia ya uchanganuzi wa kuona ambayo ni muhimu katika kupima mkusanyiko wa protini katika suluhisho. Tofauti kuu kati ya majaribio ya BCA na Bradford ni kwamba BCA inatumia muda na si sahihi, ilhali majaribio ya Bradford ni ya haraka na sahihi.
