Tofauti kuu kati ya uchujaji wa jeli na kromatografia ya mfungamano ni kwamba kromatografia ya uchujaji wa jeli inategemea tofauti za uzito wa molekuli au ukubwa wa sampuli ya uchanganuzi, ilhali kromatografia ya mshikamano inategemea mshikamano wa kichanganuzi kwa ligandi isiyohamishika.
Neno kromatografia katika kemia ya uchanganuzi hurejelea mchakato wa mgawanyo wa vijenzi katika mchanganyiko kwa kutumia mbinu tofauti. Chromatography ni jina la pamoja linalowakilisha idadi mbalimbali ya mbinu tofauti za utenganishaji.
Chromatography ya Gel Filtration ni nini?
Kromatografia ya kuchuja jeli ni mbinu ya uchanganuzi ambapo utengano wa vijenzi hutegemea tofauti ya uzito wa molekuli au ukubwa. Mbinu hii pia inajulikana kama kromatografia ya kutojumuisha ukubwa au kromatografia ya ungo wa molekuli. Mbinu ya kutenganisha katika mchakato huu inategemea uwezo tofauti wa molekuli katika sampuli kuingia kwenye vinyweleo vya chombo cha kuchuja jeli.
Katika mbinu ya kuchuja jeli, awamu ya kusimama ina ushanga wa nyenzo iliyotiwa maji, kama sifongo yenye matundu ya vipimo vya molekuli iliyo na safu nyembamba ya saizi. Ikiwa tunapitisha mmumunyo wa maji unaojumuisha molekuli za ukubwa mbalimbali kupitia safu iliyo na "sieve hizi za molekuli," molekuli ambazo ni kubwa kuliko pores za kati ya kuchuja huenda haraka kupitia safu. Kwa kulinganisha, molekuli ndogo huingia kwenye pores ya gel na huwa na hoja polepole kupitia safu. Molekuli hutoka kwenye safu kwa mpangilio wa kupungua kwa ukubwa wa molekuli. Hapa, kikomo cha kutengwa kwa jeli ni molekuli ya molekuli ndogo zaidi isiyoweza kupenya matundu ya jeli fulani.
Kuna aina tofauti za mbinu za kuchuja jeli, kama vile njia ya kuchuja jeli isiyo ya moja kwa moja, uchujaji wa gel wa hali ya uthabiti, uchanganuzi wa shanga za gel, n.k. Kromatografia ya kuchuja gel isiyo ya moja kwa moja ni muhimu katika kubainisha homoni zisizolipishwa za tezi. Kromatografia ya kuchuja jeli isiyo ya moja kwa moja ni mbinu isiyo ya moja kwa moja muhimu zaidi kwa kipimo cha steroidi zisizolipishwa kama vile kotisoli, testosterone, n.k. Uchanganuzi wa ushanga wa gel, kwa upande mwingine, ni urekebishaji wa uchujaji wa gel wa hali thabiti ambao ni rahisi zaidi kulinganisha.
Affinity Chromatography ni nini?
Kromatografia ya mshikamano ni mbinu ya uchanganuzi na mbinu ya utenganisho ambayo inategemea mwingiliano mahususi wa kisheria kati ya kano isiyohamishika na mshirika wake anayemfunga. Baadhi ya mifano ni pamoja na ufungaji wa antibody-antijeni, ufungaji wa enzyme-substrate, na ufungaji wa vizuizi vya enzyme. Kwa hivyo, mbinu hii ina matumizi mengi muhimu katika utakaso wa asidi ya nukleiki, utakaso wa protini kutoka kwa dondoo za seli, na utakaso kutoka kwa damu.
Katika mbinu hii, sifa muhimu zaidi ni ulemavu wa mishipa. Tunaweza kutumia vifaa mbalimbali kama vile acrylates na gel ya silika kwa hili. Ni muhimu kuzuia kuingiliwa kwa steric ya molekuli inayolengwa kwa ligand. Zaidi ya hayo, inhibitor inaunganishwa na awamu imara. Kizuizi hiki tunakiita spacer. Kimsingi, spacer huwa na mnyororo wa hidrokaboni.
Awamu isiyosimama ya kromatografia ya mshikamano ina kiini, spacer na ligand. Wakati mwingine, pia ina ioni ya chuma ambayo imeunganishwa na ligand. Awamu dhabiti inayopendelewa zaidi kwa awamu ya kusimama katika mbinu hii ni jeli ya agarose kwa sababu inasambazwa kwa urahisi kujaza na kufunga safu na vitanda vya resin vya ukubwa wowote, na ni kubwa ya kutosha kwa biomolecules kutiririka kwa uhuru ndani na kupitia shanga. Ligandi zinaweza kushikamana kwa ushirikiano kwenye polima ya shanga kwa njia mbalimbali. Misombo ya spacer ya kawaida ni bromidi ya sianojeni, epoksidi, epoksidi yenye asidi C6, na diamin. Kwa upande mwingine, ligand tunayoweza kutumia hutofautiana kulingana na lengo, kwa mfano, antibody-antijeni, ioni za chuma au alumini-phosphoproteini, avidin-biotin, glutathione-GST, chelator-protini zilizowekwa lebo yake, n.k.
Kuna tofauti gani kati ya Uchujaji wa Gel na Chromatography Affinity?
Chromatography ni mbinu muhimu ya uchanganuzi. Kromatografia ya uchujaji wa gel na kromatografia ya mshikamano ni tofauti mbili muhimu za kromatografia. Tofauti kuu kati ya uchujaji wa jeli na kromatografia mshikamano ni kwamba kromatografia ya uchujaji wa jeli inategemea tofauti za uzito wa molekuli au ukubwa wa sampuli ya uchanganuzi, ilhali kromatografia ya mshikamano inategemea mshikamano wa uchanganuzi kwa ligandi isiyohamishika.
Muhtasari – Uchujaji wa Gel dhidi ya Affinity Chromatography
Kuna aina tofauti za mbinu za kromatografia kulingana na matumizi yake na asili ya sampuli ya uchanganuzi. Uchujaji wa gel na chromatografia ya mshikamano ni aina mbili za mbinu kama hizo. Tofauti kuu kati ya uchujaji wa jeli na kromatografia ya mshikamano ni kwamba kromatografia ya uchujaji wa jeli inategemea tofauti za uzito wa molekuli au ukubwa wa sampuli ya uchanganuzi, ilhali kromatografia ya mshikamano inategemea mshikamano wa kichanganuzi kwa ligandi isiyohamishika.
