Tofauti kuu kati ya chromatofocusing na isoelectric focusing ni kwamba chromatofocusing ni aina ya njia ya kromatografia ya safuwima ambayo hutumia resini za kubadilishana ioni huku ulengaji wa isoelectric ni aina ya mbinu ya elektrophoresis ambayo hutumia geli za pH zisizohamishika.
Chromatofocusing na isoelectric focusing ni mbinu mbili ambazo hutenganisha protini kulingana na nukta zake za kielektroniki. Ulengaji wa chromatofocus na isoelectric una nguvu kubwa ya utatuzi. Chromatofocusing ni mbinu ya kromatografia ya safu wima ya azimio la juu ilhali ulengaji wa isoelectric ni mbinu ya kutenganisha kielektroniki. Zaidi ya hayo, chromatofocusing haitumii uga wa umeme ilhali ulengaji wa isoelectric unahitaji uga wa umeme.
Chromatofocusing ni nini?
Chromatofocusing ni aina ya kromatografia ya hali ya juu ambayo hutenganisha protini kulingana na tofauti za sehemu yake ya kielektroniki. Inatumia safu ya resini ya kubadilishana ioni na kipenyo cha pH kilichotengenezwa ndani. Tofauti na kulenga isoelectric, chromatofocusing haihusishi uwanja wa umeme. Chromatofocusing ni mbinu madhubuti ya utakaso ambayo inaweza kutatua molekuli zinazofanana sana hata zinazotofautiana kwa vitengo vya pH 0.02. Kwa hivyo, chromatofocusing inafaa zaidi kama hatua ya mwisho ya kung'arisha wakati azimio la juu linahitajika ili kutenganisha vijenzi vinavyofanana sana.
Katika chromatofocusing, sampuli inatumika kwenye safu wima kwa kuichanganya na bafa ya kuanza. Protini ambazo ziko kwenye pH juu ya kipenyo chao cha elektroni huwa na chaji hasi na husalia karibu na sehemu ya juu ya safu huku protini nyingine ambazo ziko kwenye pH chini ya nukta ya isoelectric, huhamia chini ya safu. Protini iliyo na kipenyo cha juu zaidi cha elektroni hutolewa kwanza huku protini iliyo na kipenyo cha chini kabisa cha isoelectric ikitolewa mwisho kutoka kwenye safu. Mbinu hii inathiriwa na mambo kadhaa kama vile kunyesha kwa protini na usawa wa kipenyo cha pH.
Kuzingatia kwa Isoelectric ni nini?
Ulengaji umeme ni mbinu inayotenganisha molekuli tofauti kulingana na nukta ya isoelectric. Pia inajulikana kama electrofocusing. Mbinu hii mara nyingi hutumiwa kutenganisha protini kwenye gel. Katika kulenga isoelectric, sampuli huongezwa kwenye jeli za pH zisizohamishika (IPG). Geli ya IPG ni matrix ya jeli ya acrylamide iliyounganishwa na kipenyo cha pH. Protini huhamia kwenye cathode hadi zipate eneo la pH la pointi zao za umeme. Protini inapofikia pH ambayo haina chaji halisi, uhamaji hukoma na kutoa mkanda wa kusimama. Vivyo hivyo, kila protini hutoa mkanda katika hatua ya kipenyo cha pH inayolingana na sehemu yake ya kielektroniki.
Kielelezo 01: Isoelectric Focusing
Kuzingatia kwa umeme ni hatua ya kwanza ya elektrophoresis ya gel ya pande mbili. Katika mbinu hiyo, protini hutenganishwa kwanza kulingana na nukta zao za kielektroniki kwa kulenga isoelectric na kisha kutenganishwa kwa uzito wa molekuli kupitia SDS-PAGE.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Chromatofocusing na Isoelectric Focusing?
- Chromatofocusing na isoelectric focusing ni mbinu mbili zenye utatuzi wa hali ya juu.
- Zote mbili zinatokana na kiashiria cha kielektroniki cha protini.
- Mbinu hizi hutumia kipenyo cha pH.
- Taratibu zote mbili ni taarifa kwa ajili ya kubainisha vibadala vya hemoglobini ya binadamu.
- Zinaweza kutatua molekuli ambapo thamani za pI hutofautiana kwa kiasi kidogo cha vitengo vya pH 0.02.
Kuna Tofauti gani Kati ya Chromatofocusing na Isoelectric Focusing?
Chromatofocusing ni mbinu ya kromatografia ya safu wima ya azimio la juu ambayo hutenganisha protini kulingana na sehemu yake ya kielektroniki. Kinyume chake, ulengaji wa isoelekti ni mbinu ya kielektroniki ambayo hutenganisha protini kulingana na sehemu ya isoelectric kwa kutumia uwanja wa umeme kando ya kipenyo cha pH kilichoundwa kwenye kapilari. Kwa hivyo, hii ndiyo tofauti kuu kati ya chromatofocusing na isoelectric focusing.
Tofauti nyingine kati ya chromatofocusing na isoelectric focusing ni kwamba chromatofocusing haihusishi uga wa umeme ilhali ulengaji umeme unahitaji uga wa umeme.
Muhtasari – Chromatofocusing vs Isoelectric Focusing
Chromatofocusing na isoelectric focusing ni mbinu mbili zinazofanana ambazo zina uwezo wa juu wa utatuzi wa molekuli, hasa molekuli zinazofanana sana. Chromatofocusing ni mbinu ya kromatografia ya safu wima ya azimio la juu huku ulengaji wa isoelectric ni mbinu ya elektrophoresis. Chromatofocusing haihusishi uwanja wa umeme, tofauti na ulengaji wa isoelectric. Kwa hivyo, hii ni muhtasari wa tofauti kati ya chromatofocusing na isoelectric focusing.
