Tofauti Muhimu – Forward vs Reverse Primer
Polymerase chain reaction (PCR) ni mbinu ya ukuzaji wa DNA ambayo hutumika katika matumizi ya Molecular Biological. Ni mbinu inayotumika sana ambayo hutengeneza mamilioni hadi mabilioni ya nakala za mlolongo wa DNA unaovutiwa hasa. Ni njia ya in vitro inayofanywa katika maabara. Mbinu ya PCR inategemea kabisa polimerasi ya DNA inayozalishwa kibiashara inayoitwa Taq polymerase. Na pia inahitaji vipengele vingine kadhaa na matengenezo sahihi ya joto. Sehemu moja muhimu ni primers. Vianzio ni mfuatano mfupi wa DNA iliyoundwa mahususi kwa mfuatano lengwa wa DNA. Kawaida huwa na urefu wa nyukleotidi 20. Taq polimerasi huchochea kuongezwa kwa nyukleotidi katika mfuatano uliokuwepo wa nyukleotidi. Kwa hivyo, vianzio hutumika kama sehemu za kuanzia za usanisi wa nyuzi mpya. Taq polymerase inafanya kazi katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’ kwa hivyo usanisi wa DNA hutokea katika mwelekeo ule ule wa 5’ hadi 3’. Kwa kuwa DNA imefungwa mara mbili, aina mbili za primers zinahitajika katika PCR. Zinajulikana kama primer ya mbele na primer ya nyuma. Vipimo vya mbele na vya nyuma vinaitwa kulingana na mwelekeo wa kurefusha kwa primer katika DNA wakati usanisi wa DNA hutokea. Kitangulizi cha mbele huchanganua kwa uzi wa DNA ya antisense na kuanzisha usanisi wa uzi wa +ve wa jeni katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’. Reverse primer anneals na strand hisia na kuanzisha usanisi wa strand complementary ya strand coding; ambayo ni -vesha uzi wa jeni katika mwelekeo wa 5' hadi 3'. Hii ndiyo tofauti kuu kati ya viasili vya mbele na vya nyuma.
Primer Forward ni nini?
Mwelekeo wa mbele ni usanisi wa uzi wa usimbaji au uzi wa hisi ya jeni. Taq polimasi huchochea usanisi wa uzi mpya katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’. Muundo wa uzi wa usimbaji hutokea wakati kianzio kinaposhikana na usimbaji au uzi wa antisense na kurefuka katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’.
Kielelezo 01: Sambaza Mbele na Ugeuze Viunzilishi
Kitangulizi ambacho huambatanishwa na uzi wa antisense au uzi usio na usimbaji au uzi wa kiolezo hujulikana kama kianzilishi cha mbele kwa vile kianzilishi cha mbele hufanya kazi kama kianzio cha usanisi wa usimbaji au uzi chanya wa jeni. Kitangulizi cha mbele kina mfuatano mfupi wa nyukleotidi unaosaidiana na ncha ya 3' ya ubavu wa ncha ya antisense. Inachanganywa na uzi wa antisense na kuwezesha polimerasi ya Taq kuongeza nyukleotidi zinazosaidiana na uzi wa kiolezo.
Primer Reverse ni nini?
Kitangulizi cha Nyuma ni mfuatano mfupi wa DNA unaoambatanishwa na ncha ya 3’ ya uzi wa maana au uzi wa kusimba. Kitangulizi cha Nyuma hutumika kama kianzio cha kuunganisha mfuatano wa mfuatano wa usimbaji au mfuatano wa kutosimba. Kitangulizi cha nyuma kimeundwa kusaidiana na mwisho wa 3' wa uzi wa usimbaji. Kwa hivyo, inaambatanishwa na ncha ya 3’ ya ubavu ya uzi wa usimbaji na inaruhusu Taq polimasi kuunganisha uzi wa antisense au uzi wa kiolezo. Kwa kuwa uelekeo wake ni wa kinyume, kitangulizi hiki kimetambulishwa kama kianzilishi cha kinyume.
Vitangulizi vya kurudi nyuma na vya mbele ni muhimu kwa utengenezaji wa mamilioni hadi mabilioni ya nakala za maeneo fulani ya DNA ambayo yanalengwa au kupendezwa.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Kitangulizi cha Mbele na Kinyume?
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma vimeundwa kutoka kwa oligonucleotides.
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma vina mfuatano mfupi wa nyukleotidi unaosaidiana na ncha za ubavu za nyuzi mbili za DNA.
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma kwa kawaida huwa na nyukleotidi 20.
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma vinatumika katika miitikio ya msururu wa polimerasi.
- Vitangulizi vya Mbele na vya Nyuma vimeunganishwa kibiashara.
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma vyote viwili havibadilishi halijoto na kwa kawaida huwa na Tm zinazofanana.
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma vimeunganishwa na mfuatano wa DNA lengwa.
- Vizindua vya Mbele na Nyuma vimeundwa kulingana na maitikio ya PCR.
- Vitangulizi vya Mbele na Nyuma vinatolewa kama vianzio vya ukuzaji wa DNA.
- Vitangulizi vya kurudi nyuma na vya mbele ni muhimu kwa utengenezaji wa nakala milioni ya maeneo mahususi ya mfuatano wa DNA unaolengwa au unaovutiwa.
Nini Tofauti Kati ya Kitangulizi cha Mbele na Kinyume?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Kitangulizi cha Mbele ni mfuatano mfupi wa DNA ambao huchanganywa na mwisho wa 3’ wa kutosimba au safu ya kiolezo cha jeni na hutumika kama mahali pa kuanzia kusanisi mfuatano wa usimbaji. | Kitangulizi cha Nyuma ni mfuatano mfupi wa DNA ambao huchanganywa na ncha ya 3' ya usimbaji au msururu usio na kiolezo na hutumika kama mahali pa kuanzia ili kusawazisha mfuatano usio wa kusimba. |
| Annealing Strand | |
| Sambaza nakala za kwanza kwa uzi wa kiolezo. | Reverse primer anners na nontemplate strand. |
| Kutokeza Mlolongo Mpya | |
| Kitangulizi cha Mbele huwezesha usanisi wa mfuatano wa usimbaji. | Kitangulizi cha kugeuza nyuma huwezesha usanisi wa mfuatano wa kutosimba. |
Muhtasari – Forward vs Reverse Primer
Kuna aina mbili za vianzio vinavyohusika katika mbinu ya PCR. Wao ni vitangulizi vya mbele na vya nyuma. Kulingana na urefu wa kitangulizi katika usanisi mpya wa uzi wa DNA, viasili hivi vina lebo au kupewa jina. Taq polimasi huunganisha DNA mpya katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’. Kwa hivyo, vianzio vimeundwa kama nyongeza kwa ncha 3 za nyuzi mbili. Kitangulizi cha mbele ambacho hurefuka katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’ huchanganywa na ncha ya 3’ ya antisense au kiolezo au mfuatano wa kutosimba. Hutumika kama mahali pa kuanzia kusanisi mfuatano wa usimbaji. Kitangulizi cha nyuma ambacho hurefuka katika mwelekeo wa 5’ hadi 3’ huchanganywa na ncha ya 3’ ya usimbaji au kiolezo kisicho na kiolezo au uzi wa maana. Hutumika kama mahali pa kuanzia kusanisi mfuatano wa kutosimba. Hii ndio tofauti kati ya kitangulizi cha mbele na cha nyuma.
