Tofauti kuu kati ya majaribio ya kawaida ya PCR yaliyowekwa kiota na ya wakati halisi ni kwamba PCR ya kawaida ni mbinu iliyobuniwa ili kukuza mfuatano mahususi wa DNA na PCR iliyoorodheshwa ni urekebishaji wa PCR ya kawaida ambayo ina miitikio miwili ya upanuzi inayofuatana, wakati halisi. -time PCR ni lahaja la PCR ya kawaida ambayo inaweza kubainisha bidhaa iliyokuzwa.
PCR ni mbinu ya kisayansi inayotumika sana katika utafiti na dawa kugundua DNA. Vipimo vya PCR hutumiwa kugundua antijeni kwa kugundua DNA au RNA zao. Kwa ujumla, RNA ya virusi iko kwenye mwili kabla ya kugundua kingamwili au kuonyesha dalili za ugonjwa. Kipimo cha PCR kinaweza kujua kama mtu ana virusi mapema au la. Kwa sasa, PCR ndicho kipimo cha kawaida cha kugundua ugonjwa wa COVID-19. Kuna aina tofauti za mbinu za PCR kama vile PCR ya wakati halisi, PCR iliyoorodheshwa, multiplex PCR, PCR ya kuanza moto na PCR ya masafa marefu, n.k.
Vipimo vya Kawaida vya PCR ni nini?
Upimaji wa PCR wa kawaida ni mbinu ya ukuzaji wa DNA ya ndani inayofanywa mara kwa mara katika maabara ya kibaolojia ya molekuli. Njia hii iliwezesha kutokeza maelfu hadi mamilioni ya nakala za kipande fulani cha DNA. Kary Mullis alianzisha mbinu hii mwaka wa 1980. Mbinu hii inahitaji kipande cha DNA kinachojulikana kama kiolezo ili kutengeneza nakala zake nyingi. Taq polymerase hufanya kazi kama kimeng'enya cha polimerasi ya DNA na huchochea usanisi wa nyuzi mpya za mfuatano wa kiolezo.
Primers katika mchanganyiko wa PCR zitafanya kazi kama sehemu za kuanzia kwa viendelezi vya vipande. Viungo vyote vinavyohitajika kutengeneza nakala za DNA vimejumuishwa kwenye mchanganyiko wa PCR. Mwitikio wa PCR unaendeshwa katika mashine ya PCR, na inapaswa kulishwa kwa mchanganyiko sahihi wa PCR na programu sahihi ya PCR. Ikiwa mchanganyiko wa majibu na programu ni sahihi, itatoa nambari inayohitajika ya nakala za sehemu fulani ya DNA kutoka kwa kiasi kidogo sana cha DNA.
Kielelezo 01: Kipimo cha Kawaida cha PCR
Kuna hatua tatu kuu zinazohusika katika maitikio ya PCR: urekebishaji, uwekaji wa sehemu ya kwanza na kiendelezi cha uzi. Hatua hizi tatu hutokea kwa joto tatu tofauti. Bafa ya PCR hudumisha hali bora kwa kitendo cha Taq polimerasi. Hatua hizi tatu za mmenyuko wa PCR hurudiwa ili kutoa kiasi kinachohitajika cha bidhaa ya PCR. Katika kila majibu ya PCR, idadi ya nakala za DNA huongezeka maradufu. Kwa hivyo, ukuzaji wa kielelezo unaweza kuzingatiwa katika PCR. Bidhaa ya PCR inaweza kutatuliwa kwa kutumia gel electrophoresis kwa kuwa hutoa kiasi kinachoonekana cha DNA kwenye jeli, na inaweza kusafishwa kwa masomo zaidi kama vile kupanga mfuatano.
PCR ni zana muhimu katika utafiti wa matibabu na kibaolojia. Hasa katika tafiti za kitaalamu, PCR ina thamani kubwa kwa vile inaweza kukuza DNA kwa ajili ya tafiti kutoka kwa sampuli ndogo za wahalifu na kutengeneza wasifu wa uchunguzi wa DNA. PCR inatumika sana katika maeneo mengi ya baiolojia ya molekuli ikijumuisha, uchapaji jeni, uundaji wa jeni, utambuzi wa mabadiliko, mpangilio wa DNA, safu ndogo za DNA, na upimaji wa baba.
Nested PCR Assays ni zipi?
Nested PCR ni aina ya PCR ambayo hupunguza ukuzaji usio mahususi wa DNA. Kuna PCR mbili zinazofuatana au athari mbili za ukuzaji mfuatano katika jaribio la PCR lililowekwa. Wakati wa mmenyuko wa kwanza wa amplification, bidhaa ya PCR hutolewa. Baada ya majibu ya kwanza, mmenyuko wa pili wa amplification unafanywa kwenye bidhaa ya PCR ya majibu ya kwanza. Kwa hivyo, vianzio katika mchanganyiko wa pili wa athari hufunga na bidhaa ya kwanza ya PCR na kuikuza.
Kielelezo 02: Nested PCR
Jozi za awali ni tofauti katika kila jibu. Ufungaji usio maalum wa primers hupunguzwa katika PCR iliyohifadhiwa. Majaribio ya PCR yaliyowekwa ni muhimu ili kuongeza usikivu na/au umaalum. Hata hivyo, PCR iliyoorodheshwa inahitaji maarifa kuhusu mfuatano unaovutiwa.
Uchambuzi wa PCR wa Wakati Halisi ni upi?
PCR ya wakati halisi au PCR ya kiasi (Q PCR) ni toleo lililobadilishwa la PCR ambalo hupima bidhaa za PCR kwa wingi. Kwa hivyo, mbinu hii inakadiria ukuzaji kwa wakati halisi kwa kutumia mashine ya wakati halisi ya PCR. Pia ni njia inayofaa ya kubainisha kiasi cha mfuatano lengwa au jeni iliyopo kwenye sampuli.
Sifa ya kuvutia ya PCR ya wakati halisi ni kwamba inachanganya ukuzaji na ukadiriaji wa kweli kuwa hatua moja. Kwa hiyo, haja ya electrophoresis ya gel kwa ajili ya kugundua inaweza kuondolewa kwa mbinu ya muda halisi ya PCR. Utumiaji wa rangi za umeme kuweka lebo kwenye bidhaa za PCR wakati wa miitikio ya PCR hatimaye itasababisha ukadiriaji wa moja kwa moja. Bidhaa za PCR zinapokusanywa, ishara za umeme pia hukusanywa, na zitapimwa kwa mashine ya wakati halisi. SYBR Green na Taqman ni njia mbili za kugundua au kutazama mchakato wa ukuzaji wa PCR ya wakati halisi. Mbinu zote mbili hufuatilia maendeleo ya mchakato wa ukuzaji na kuripoti wingi wa bidhaa kwa wakati halisi.
Kielelezo 03: PCR ya Wakati Halisi
PCR ya wakati halisi ina aina mbalimbali za matumizi kama vile ukadiriaji wa usemi wa jeni, uchanganuzi wa RNA usio na misimbo, uchanganuzi wa SNP, ugunduzi wa lahaja za nambari za nakala, utambuzi wa mabadiliko nadra, utambuzi wa viumbe vilivyobadilishwa vinasaba na utambuzi wa mawakala wa kuambukiza.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Majaribio ya PCR ya Kawaida na ya Wakati Halisi?
- Majaribio ya PCR yaliyowekwa na ya wakati halisi ni marekebisho ya majaribio ya kawaida ya PCR.
- Mbinu zote tatu hukuza sampuli za DNA.
- Bidhaa zao zinaweza kutumika katika mpangilio au uchanganuzi.
- Majaribio haya yanahitaji vianzio.
Kuna Tofauti gani Kati ya Tathmini ya PCR ya Kawaida na ya Wakati Halisi?
PCR ya Kawaida ni mbinu iliyobuniwa ili kukuza mfuatano mahususi wa DNA. Wakati huo huo, Nested PCR ni urekebishaji wa PCR ya kawaida ambayo ina miitikio miwili ya mfulizo ya ukuzaji, na PCR ya wakati halisi ni lahaja ya PCR ya kawaida ambayo inaweza kubainisha bidhaa iliyokuzwa. Kwa hivyo, hii ndio tofauti kuu kati ya majaribio ya PCR ya kawaida na ya wakati halisi. Tofauti na PCR ya kawaida na ya wakati halisi, PCR iliyoorodheshwa hutumia seti mbili za msingi. Zaidi ya hayo, kuna athari mbili zinazofuatana za ukuzaji katika PCR iliyoorodheshwa ili kupunguza ukuzaji usio mahususi. kando na hayo, majaribio ya PCR ya kawaida na ya wakati halisi hayana miitikio miwili ya mfuatano ya ukuzaji.
Infographic ifuatayo inaorodhesha tofauti kati ya majaribio ya PCR ya kawaida na ya wakati halisi katika muundo wa jedwali kwa ulinganisho wa bega kwa bega.
Muhtasari – Kawaida dhidi ya Nested vs Majaribio ya PCR ya Wakati Halisi
PCR ya Kawaida ndiyo mbinu ya kwanza iliyoundwa ili kukuza vipande mahususi vya DNA. PCR iliyoorodheshwa na PCR ya wakati halisi ni vibadala viwili vya PCR ya kawaida. Kuna miitikio miwili ya mfulizo ya ukuzaji na utumiaji wa seti mbili za utangulizi katika PCR iliyowekwa. PCR ya wakati halisi imeundwa ili kuhesabu bidhaa ya PCR iliyokuzwa. Kwa hivyo, hii ni muhtasari wa tofauti kati ya majaribio ya PCR ya kawaida na ya wakati halisi.
