Tofauti kuu kati ya Klenow na T4 DNA polymerase ni kwamba kipande cha Klenow ni kipande kikubwa cha E. coli DNA polymerase 1 huku T4 DNA polymerase ni DNA polymerase 1 ya bacteriophage T4.
DNA polimasi ni vimeng'enya vinavyochochea uundaji wa DNA kwa kuongeza deoxyribonucleotidi kwenye mwisho wa 3′-OH wa kianzilishi kilichokuwapo awali. Kuna aina tofauti za polima za DNA. Polima nyingi za DNA zinazotumiwa katika biolojia ya molekuli ni polima za DNA za prokariyoti. Klenow fragment na T4 DNA polymerase ni aina mbili za polima za DNA ambazo zina asili ya prokaryotic. Klenow fragment ni kipande kikubwa ambacho hutolewa kutoka kwa kupasuka kwa E.coli DNA polimasi 1 katika vipande viwili na subtilisin ya bakteria ya protease. T4 DNA polymerase ni DNA polymerase 1 ya bacteriophage T4. Klenow na T4 DNA polimasi zina 5′→3′ polimasi na 3′→5′ shughuli exonuclease. Zote zinakosa 5′→3′ shughuli ya exonuclease, na kuzifanya zifae zaidi kwa matumizi mengi katika biolojia ya molekuli.
Klenow ni nini?
Kipande cha Klenow ni polimerasi ya DNA ambayo ni muhimu katika biolojia ya molekuli. Wakati E. coli DNA polymerase 1 inapitia digestion ya proteolytic na protease ya bakteria, subtilisin, husababisha vipande viwili: moja ni kipande kikubwa, na nyingine ni kipande kidogo. Klenow fragment ni kipande kikubwa ambacho kina ukubwa wa kDa 68. Kipande cha Klenow kina 5′→3′ polimasi na 3′→5′ exonuclease (kusahihisha) shughuli za DNA Pol I. Shughuli ya 3′→5′ ya exonuclease ya kipande cha Klenow hurahisisha uondoaji wa besi zilizoongezwa kimakosa kadri upolimishaji unavyoendelea. Kipande cha Klenow hakina 5′→3′ shughuli ya exonuclease, ambayo inaonyeshwa na urefu kamili au E.coli DNA polimasi 1. Ni faida wakati tu shughuli ya upolimishaji inahitajika peke yake. Vipande vya Klenow hutumika kujaza viambato 5’, usanisi wa vichunguzi, DNA ya mfuatano, usanisi wa DNA yenye ncha mbili, usanisi wa uzi wa pili wa cDNA na mutagenesis inayoelekezwa kwenye tovuti.
Kielelezo 01: Kipande cha Klenow
Katika baadhi ya programu, shughuli ya 3′→5′ ya exonuclease ya kipande cha Klenow pia inakuwa isiyofaa. Inaweza kuondolewa kwa kuanzisha mabadiliko ya jeni ambayo huweka misimbo ya kipande cha Klenow. Kipande kilichotokana cha Klenow kinajulikana kama kipande cha exo-Klenow. Kwa hivyo, kipande cha exo-Klenow kina shughuli ya polimerasi 5′→3′ ya E. koli polimasi 1.
T4 DNA Polymerase ni nini?
T4 DNA polymerase ni DNA polimasi ambayo huchochea usanisi wa DNA. Ni protini iliyowekwa na Bacteriophage T4. Kimuundo, T4 DNA polymerase ni protini 898 iliyobaki ya amino asidi (uzito wa molekuli ya 103.6 kDa). Inahitaji kiolezo na kianzio ili kuchochea usanisi.
Kielelezo 02: T4 DNA Polymerase
Sawa na kipande cha Klenow, T4 DNA polimasi ina 5′→3′ polymerase na 3′→5′ shughuli za exonuclease. Zaidi ya hayo, inakosa 5′→3′ shughuli ya exonuclease pia. T4 DNA polymerase ni muhimu katika kujaza ncha 5 zinazochomoza za vipande vya DNA. Pia mara nyingi hutumiwa kuweka lebo ya 5′-end au 3′-end ya DNA yenye nyuzi mbili. T4 DNA polimasi hutumiwa mara kwa mara katika uundaji wa kloni butu. Shughuli ya 3′→5′ exonuclease (kusahihisha) ya T4 DNA polymerase ina nguvu zaidi (zaidi ya mara 200) kuliko kipande cha Klenow. Muhimu zaidi, T4 DNA polymerase ina mchakato wa juu (nyukleotidi 400 kwa sekunde).
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya Klenow na T4 DNA Polymerase?
- Klenow na T4 DNA polimasi ni polimerasi mbili za prokaryotic.
- Polima zote mbili zina 5′→3′ polimasi na 3′→5′ shughuli ya exonuclease.
- Hazionyeshi shughuli ya 5′→3′ ya exonuclease.
- Enzymes zote mbili zinahitaji kiolezo na kianzio ili kuchochea usanisi wa DNA.
- Enzymes hizi zinaweza kuzimwa joto ifikapo 75 0
Kuna tofauti gani kati ya Klenow na T4 DNA Polymerase?
Tofauti kuu kati ya Klenow na T4 DNA polymerase ni asili ya kila kimeng'enya. Kipande cha Klenow kimetokana na bakteria wakati T4 DNA polymerase inatoka kwa bacteriophage ambayo ni virusi. T4 DNA polymerase ina mchakato wa juu kuliko kipande cha Klenow. Zaidi ya hayo, polimasi ya DNA ya T4 ina shughuli kali ya kusahihisha kuliko kipande cha Klenow. Kwa hivyo, hii ni tofauti nyingine kati ya Klenow na T4 DNA polymerase.
Mchoro wa maelezo hapa chini unaorodhesha tofauti zaidi kati ya Klenow na T4 DNA polymerase katika muundo wa jedwali.
Muhtasari – Klenow vs T4 DNA Polymerase
Kipande cha Klenow ni kipande kikubwa cha E. koli DNA polimasi 1. Ina 5′→3′ tu ya polimasi na 3′→5′ shughuli za exonuclease. Inakosa 5′→3′ shughuli ya exonuclease ya E. coli DNA pol 1. Kwa hiyo, kipande cha Klenow ni polymerase ya bakteria. Kwa upande mwingine, T4 DNA polymerase ni polimasi iliyosimbwa na bacteriophage T4. Sawa na kipande cha Klenow, kina 5′→3′ polimasi na 3′→5’ shughuli za exonuclease, na haina 5′→3′ shughuli ya exonuclease. Hata hivyo, T4 DNA polimasi ina mchakato wa juu na shughuli ya juu ya kusahihisha kuliko kipande cha Klenow. Kwa hivyo, hii ndiyo tofauti kuu kati ya Klenow na T4 DNA polymerase.
