Tofauti kuu kati ya tafsiri ya nick na kujaza mwisho ni kwamba tafsiri ya nick ni mchakato unaounda uchunguzi wa DNA ulio na lebo kwa athari mbalimbali za mseto huku ujazo wa mwisho ni mbinu ambayo huunda vipande visivyo na butu kwa kuongeza nyukleotidi kwenye mianzi yenye ncha moja.
Tafsiri ya Nick na kujaza mwisho ni mbinu mbili zinazotumika katika baiolojia ya molekuli. Utafsiri wa nick hutumiwa kwa uchunguzi wa lebo kwa ajili ya mseto ili kugundua mfuatano mahususi wa nyukleotidi. Ujazaji wa mwisho hutumiwa kutengeneza vipande vilivyokuwa butu ambavyo vilikuwa na ncha zinazonata na viambato vyenye nyuzi moja. Mbinu zote mbili zina umuhimu mkubwa, na hufanywa mara kwa mara katika maabara za utafiti wa molekuli.
Nini Tafsiri ya Nick?
Tafsiri ya Nick ni mbinu muhimu inayotumiwa kutayarisha uchunguzi ulio na lebo kwa mbinu mbalimbali za kibiolojia za molekuli kama vile blotting, in situ hybridization, fluorescent in situ hybridization, n.k. Ni mbinu ya ndani ya uwekaji lebo ya DNA. Vichunguzi vya DNA hutumiwa kutambua mfuatano maalum wa DNA au RNA. Kwa msaada wa uchunguzi unaoitwa, vipande maalum vinaweza kuashiria au kuonekana kutoka kwa mchanganyiko tata wa asidi ya nucleic. Kwa hiyo probe zilizo na lebo hutayarishwa kwa kutumia mbinu mbalimbali. Utafsiri wa Nick ni mojawapo ya mbinu hizo ambayo hutoa uchunguzi wenye lebo kwa usaidizi wa vimeng'enya vya DNase 1 na DNA polymerase 1.
Kielelezo 01: Tafsiri ya Nick
Mchakato wa kutafsiri Nick huanza na shughuli ya kimeng'enya cha DNase 1. DNase 1 inatanguliza nick kwenye uti wa mgongo wa fosfeti wa DNA yenye ncha mbili kwa kukata vifungo vya phosphodiester kati ya nyukleotidi. Mara tu nick inapoundwa, kikundi cha bure cha 3′ OH cha nyukleotidi kitatolewa, na kimeng'enya cha DNA polymerase 1 kitachukua hatua juu yake. Shughuli ya 5′ hadi 3′ ya exonuclease ya DNA polymerase 1 huondoa nyukleotidi kutoka kwenye niko kuelekea upande wa 3′ wa uzi wa DNA.
Sambamba na hayo, shughuli ya polimerasi ya kimeng'enya cha DNA polymerase 1 hufanya kazi na kuongeza nyukleotidi kuchukua nafasi ya nyukleotidi zilizoondolewa. Ikiwa nucleotides zimeandikwa, uingizwaji utatokea kwa nucleotides iliyoandikwa, na itaashiria DNA kwa ajili ya utambuzi. Hatimaye, DNA hii mpya iliyosanifiwa inaweza kutumika kama uchunguzi katika miitikio mbalimbali ya mseto.
Kumaliza Kujaza ni Nini?
Mwisho wa kujaza ni mbinu inayotumika katika baiolojia ya molekuli kutengeneza vipande vilivyo butu. Kizuizi digestion hutoa vipande na overhangs. Vipande hivi vinaweza visiendani na kuunganisha kwenye vekta za plasmid. Vekta mara nyingi hutiwa butu ili kuruhusu miisho isiyooana kuunganishwa. Kwa hivyo, vipande vilivyo na viambatisho vinaweza kuwa butu kwa kuongeza nyukleotidi kwenye uzi unaosaidiana kwa kutumia overhang kama kiolezo cha upolimishaji. Mchakato huu unajulikana kama kujaza mwisho.
polima za DNA kama vile kipande cha Klenow cha DNA Polymerase I na T4 DNA Polymerase huchochea ujazo wa mwisho. Wanaongeza nyukleotidi kujaza (5′ → 3′) na kutafuna tena (3′ → 5′). Mara tu ncha za kunata zinapojazwa, huwa butu, na ziko tayari kuunganisha kwenye vekta.
Zaidi ya hayo, kujaza mwisho kunaweza kutumiwa kuweka lebo kwenye molekuli za DNA. Hata hivyo, inaweza kutumika tu kuweka lebo kwenye molekuli za DNA zenye ncha zinazonata. Ikilinganishwa na tafsiri ya nick, kujaza mwisho ni njia ya upole ambayo mara chache husababisha kukatika kwa DNA.
Nini Zinazofanana Kati ya Tafsiri ya Nick na Kumaliza Kujaza?
- Tafsiri zote mbili za utani na ujazo wa mwisho ni mbinu za kibaolojia za molekuli.
- Zinaweza kutumika kuweka lebo lebo za uchunguzi.
- Wote wawili wako kwenye lishe
Kuna tofauti gani kati ya Tafsiri ya Nick na Kumaliza Kujaza?
Tafsiri ya Nick ni mbinu inayounda uchunguzi wenye lebo kwa ajili ya mseto. Kinyume chake, kujaza mwisho ni mbinu ambayo huunda vipande butu vya kuunganisha kwenye vekta. Kwa hivyo, hii ndio tofauti kuu kati ya tafsiri ya nick na kujaza mwisho. Zaidi ya hayo, tafsiri ya Nick inahitaji matumizi ya shughuli ya 5'to 3′ exonuclease ilhali kujaza mwisho hakuhitaji shughuli ya exonuclease 5'hadi 3′.
Infografia iliyo hapa chini inaweka jedwali la tofauti kati ya tafsiri ya nick na kumaliza kujaza kwa undani zaidi.
Muhtasari – Tafsiri ya Nick dhidi ya Maliza Kujaza
Tafsiri ya Nick ni mbinu inayojumuisha nyukleotidi zilizo na alama za redio kwenye DNA. Huunganisha probe zilizo na lebo kulingana na shughuli za vimeng'enya vya DNase 1 na E. coli DNA polymerase 1. Kujaza kwa mwisho, kwa upande mwingine, ni mbinu ambayo hutoa vipande visivyo wazi. Wakati vipande vina ncha za kunata (overhangs zilizopigwa moja), ni muhimu kuzifanya kuwa na ncha zilizopigwa ili kuunganisha kwenye vectors. Kujaza kwa mwisho huongeza nyukleotidi zinazooana na huunda vipande vya mwisho butu ili kuvifanya viendane na kuunganisha. Kwa hivyo, hii inatoa muhtasari wa tofauti kati ya tafsiri ya nick na kujaza mwisho.
