Tofauti Muhimu – T4 vs T7 DNA Ligase
DNA ligase ni kimeng'enya muhimu kinachotumika katika mbinu za baiolojia ya molekuli. Inafanya kazi kama gundi ya Masi ili kuunganisha nyukleotidi kwa kuunda vifungo vya phosphodiester kati ya nyukleotidi. Vifungo vya phosphodiester huundwa kati ya mwisho wa 3' hidroksili ya sehemu ya sukari na kikundi cha 5' mwisho cha phosphate. DNA ligase ni muhimu katika mchakato wa urudufishaji ili kujiunga na vipande vya Okazaki vya uzi uliolegea na wakati wa taratibu za kurekebisha DNA na majaribio ya uundaji wa vitro cloning ili kuunganisha jeni inayotakikana ya riba kwa jenomu ya vekta. Kuna ligasi kuu mbili za DNA zinazotumiwa kwa sasa na wanabiolojia wa molekuli: T4 na T7 liga za DNA. T4 DNA ligase ni mojawapo ya vimeng'enya vya kwanza kutengwa na bacteriophage ya T4. T7 DNA ligase, ambayo ni protini ndogo, ni kimeng'enya kilichotengwa na T7 bacteriophage. Hii ndiyo tofauti kuu kati ya T4 na T7 DNA ligases.
Kitendo cha DNA Ligase ni nini?
Mshikamano wa DNA hutokea katika majibu ya hatua tatu. Hatua ya kwanza ni shambulio la nukleofili kwenye alpha-fosforasi ya ATP inayozalisha kimeng'enya-adenylate cha kati ambapo AMP inaunganishwa na nitrojeni ya mnyororo wa upande wa mwisho wa lisini. Katika hatua ya pili, shambulio la nukleofili hutokea kwenye fosforasi ya enzyme-adenylate na substrate ya 5'-phosphate-terminated DNA, ikitoa lysine na kutengeneza DNA-adenylate. Katika hatua ya mwisho, DNA-adenylate inashambuliwa na 3’- OH ya mkondo mwingine wa DNA, ikitoa AMP na kuunganisha polynucleotides.
T4 DNA Ligase ni nini?
T4 Ligase ilikuwa ligase ya kwanza kutengwa na kutambuliwa na Meselson, Weigle, na Kellenberger na ilikuwa ya kwanza kuwahi kutokea kibiashara. T4 DNA ligase ni kimeng'enya tegemezi cha ATP ambacho huchochea uundaji wa dhamana ya phosphodiester. Ni mnyororo mmoja wa polipeptidi yenye mabaki 487 ya asidi ya amino na ina uzito wa molekuli wa takriban 77 kDa. PH bora zaidi kwa shughuli zake ni kati ya 7.5 - 8.
Kielelezo 01: T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase, kama jina lake linavyopendekeza, inapatikana katika bacteriophage T4 na ilitengwa wakati fagio ilipotoa kimeng'enya baada ya kuambukizwa na E. koli. Kimeng'enya huunganisha sehemu mbili za DNA zilizo na ncha mbili zenye ncha butu na vipande vitakavyofungwa vinapaswa kuwa karibu na kila kimoja.
T7 DNA Ligase ni nini?
T7 ligase ni protini ya kDa 41 inayozalishwa na T7 Bacteriophage na hutengwa kwa kuambukiza seli za E. koli. Kazi kuu ya T7 ligase ni kuunganisha duplexes za DNA kupitia miunganisho ya phosphodiester na kujiunga na vipande vya karibu vya DNA wakati wa majaribio ya uundaji wa cloning. PH bora zaidi kwa T7 DNA ligase iko katika anuwai ya 7.0 - 7.2. T7 ligase inategemea ATP. Ligasi za DNA za T7 pia zina uwezo wa kunyonya DNA na mahuluti ya RNA, na hivyo kusababisha miunganisho isiyo ya kawaida wakati wa unakili; hata hivyo, jambo hili bado liko chini ya utafiti na tafiti za in vitro.
Je, Kuna Ufanano Gani Kati ya T4 na T7 DNA Ligase?
- T4 na T7 DNA Ligase hushiriki katika mmenyuko wa kuunganisha kwa kuunganisha duplexes za DNA kupitia uundaji wa dhamana ya phosphodiester kati ya mwisho wa 3' OH na mwisho wa 5' wa fosfeti wa kipande cha DNA.
- Enzymes zote mbili ligate blunt zilizomaliza DNA duplexes ambazo ziko karibu sana.
- Enzymes zote mbili zinategemea ATP.
- Enzymes hizi hutengwa kwa kuambukiza seli za E. koli kwa bacteriophage mahususi.
- Matumizi ya vimeng'enya vyote viwili ni pamoja na:
- Kuunganisha kwa molekuli - kuunganisha jeni la kuvutia kwa vekta
- Urekebishaji wa DNA - kukarabati sehemu zenye mistari miwili
- Urudiaji wa DNA katika vitro
- Mitikio ya mnyororo wa Ligase
Kuna tofauti gani kati ya T4 na T7 DNA Ligase?
T4 vs T7 DNA Ligase |
|
| T4 DNA Ligase aina ya DNA ligase iliyotengwa na bacteriophage T4 na inahusika katika kuunganisha vipande vya DNA vilivyo karibu kupitia uundaji wa dhamana ya phosphodiester. | T7 DNA Ligase aina ya DNA ligase iliyotengwa na bacteriophage T7 na inahusika katika kuunganisha vipande vya DNA vilivyo karibu kupitia uundaji wa dhamana ya phosphodiester. |
| Ukubwa wa Protini | |
| Ukubwa wa T4 DNA ligase ni 77 kDa - kubwa ikilinganishwa na ligase ya T7 ya DNA. | Ukubwa wa T7 DNA ligase ni 41 kDa. |
| pH bora zaidi | |
| pH ambayo inafanya kazi T4 DNA ligase ni 7.5 - 8.0. | pH ambayo inafanya kazi T7 DNA ligase ni 7.0 - 7.2. |
Muhtasari – T4 vs T7 DNA Ligase
Ligasi za DNA ni aina muhimu ya vimeng'enya vinavyohusika katika uunganishaji wa molekuli ili kutoa molekuli za DNA zinazojumuisha chembe za jeni za kuvutia. Mwitikio wa kuunganisha ni athari ya kutumia nishati na kuna tafiti za riwaya zinazoendelea ili kuboresha usahihi kupitia kurekebisha ligasi zinazopatikana. Ligasi za DNA za T4 na T7 ni aina mbili za vimeng'enya muhimu vya DNA ligase vinavyotumika katika mbinu za kibayolojia za molekuli. T7 DNA ligase pia ni matokeo ya utafiti ambao ulitokana na ligase ya msingi iliyotengwa na E. koli iliyoambukizwa T4. T7 inaonyeshwa ufanisi zaidi na usahihi katika kutekeleza kazi yake kutokana na ukubwa wake mdogo. Hii ndio tofauti kati ya T4 na T7 ligase.
Pakua Toleo la PDF la T4 vs T7 DNA Ligase
Unaweza kupakua toleo la PDF la makala haya na uitumie kwa madhumuni ya nje ya mtandao kulingana na madokezo ya manukuu. Tafadhali pakua toleo la PDF hapa Tofauti Kati ya T4 na T7 Ligase.
