Tofauti kuu FPLC na HPLC ni kwamba FPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu ambayo husafisha biomolecules kubwa kama vile protini, nyukleotidi na peptidi, wakati HPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu inayotenganisha misombo midogo ya uzito wa molekuli.
Kromatografia kioevu ni mbinu inayotumiwa kutenganisha sampuli katika vijenzi vyake mahususi. Utengano huu hutokea kutokana na mwingiliano wa sampuli maalum na awamu za simu na za stationary. Vipengele ndani ya sampuli hutenganishwa kulingana na mshikamano wa kila kijenzi kwa awamu ya rununu katika kromatografia ya kioevu. Awamu ya rununu na sampuli inapopita kwenye safu, vijenzi vya sampuli huanza kutengana katika mikanda ambayo inaweza kutambuliwa na uchunguzi wa UV-VIS. Kwa hivyo, FPLC na HPLC ni aina mbili za mbinu za kromatografia ya kioevu.
FPLC ni nini?
FPLC ni aina ya kromatografia kioevu ambayo husafisha biomolecules kubwa kama vile protini, nyukleotidi na peptidi. Kromatografia ya kioevu ya protini ya haraka (FPLC) ilitengenezwa kwa mara ya kwanza na kuuzwa nchini Uswidi na kampuni ya Pharmaca mnamo 1982. Mara nyingi hutumiwa kuchanganua au kusafisha mchanganyiko wa protini. Hii hufanyika kwa kuzingatia kanuni ya sampuli za vipengele vya ushirika kwa ajili ya kusonga maji (awamu ya simu) na nyenzo ya porous imara (awamu ya stationary). Katika FPLC, awamu ya rununu ni buffer, na awamu ya stationary ni resin inayojumuisha shanga. Kwa kawaida huwa na agarosi iliyounganishwa na kupakiwa kwenye kioo cha silinda au safu wima ya plastiki.
Kielelezo 01: FLPC (Kifaa cha Uchanganuzi wa Kioevu cha Protini Haraka)
Katika mikakati mingi ya FLPC, utomvu wa kubadilisha ioni hutumiwa. Kwa hiyo, protini ya riba itafunga kwa resin kwa kuingiliana kwa malipo. Mbinu ya FLPC pia hutumia bafa mbili: bafa 1 (bafa inayoendesha) na bafa 2 (bafa ya elution). Hapo awali, wakati wa kuendesha bafa na mchanganyiko wa sampuli kupitia safu, protini inayovutia kwenye mchanganyiko itafunga kwenye resini kwa mwingiliano wa malipo. Lakini protini ya riba hutenganishwa na kurudi kwenye suluhisho katika bafa ya elution wakati bafa ya elution inapopitia safu mwishoni mwa mchakato. Baadaye, suluhisho (eluant ambayo ina protini ya riba) hupitia detectors mbili, ambayo hupima mkusanyiko wa chumvi na mkusanyiko wa protini. Kila protini inavyofichuliwa, inaonekana kama "kilele" wakati wa utambuzi na inaweza kukusanywa kwa matumizi zaidi.
HPLC ni nini?
HPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu ambayo hutenganisha viambajengo vidogo vya uzito wa molekuli. Mnamo 1969, HPLC ya kwanza ilitengenezwa kibiashara na Shirika la Waters, USA. Katika kromatografia ya kioevu ya utendaji wa juu (HPLC), mchanganyiko wa sampuli (analyte) katika kutengenezea (awamu ya rununu) hupigwa kupitia safu na nyenzo za upakiaji wa chromatographic (awamu ya stationary) kwa shinikizo la juu. Sampuli ya mchanganyiko hubebwa na mkondo wa gesi ya kibebea inayosonga ya heliamu au nitrojeni.
Kielelezo 02: HPLC (Chromatography ya Utendaji wa Juu ya Kioevu)
Vipengee katika sampuli ya mchanganyiko ambavyo vina kiasi kidogo zaidi cha mwingiliano na awamu ya tuli au kiasi kikubwa cha mwingiliano na awamu ya simu vitaondoka kwenye safu wima haraka zaidi. Kwa upande mwingine, vipengele katika mchanganyiko wa sampuli ambavyo vina kiasi kikubwa cha mwingiliano na awamu ya stationary au kiasi kidogo cha mwingiliano na awamu ya simu vitatoka kwa safu polepole. Kulingana na kanuni ya mwingiliano hapo juu, vipengele vya mchanganyiko wa sampuli vinaweza kutenganishwa. Zaidi ya hayo, kitambua kifaa hutambua kila sehemu ya mchanganyiko wa sampuli ambayo hutoka kwenye safu. HPLC hutumika kukagua sampuli za kimazingira na kibayolojia kwa kuwepo au kutokuwepo kwa misombo inayojulikana, kama vile dawa, sumu au dawa za kuulia wadudu. Inatumika katika tasnia tofauti kama vile dawa, mazingira, uchunguzi na kemikali.
Je, Ni Nini Zinazofanana Kati ya FPLC na HPLC?
- FPLC na HPLC ni aina za kromatografia ya kioevu.
- Zote mbili hutumika kutenganisha na kutambua sampuli za kibayolojia.
- Zina awamu ya simu ya kioevu na awamu thabiti ya kusimama.
- Mbinu zote mbili hutumia safu kupitisha sampuli.
- Mbinu hizi hutumia pampu, vigunduzi, vali na programu kwa ajili ya kutenganisha na kutambua sampuli.
Nini Tofauti Kati ya FPLC na HPLC?
FPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu ambayo hutumiwa kusafisha biomolecules kubwa kama vile protini, nyukleotidi na peptidi. HPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu ambayo hutumiwa kutenganisha misombo ndogo ya uzito wa molekuli. Kwa hivyo, hii ndio tofauti kuu kati ya FPLC na HPLC. Zaidi ya hayo, FPLC hutumia pH na vichunguzi vya conductivity pamoja na wakusanyaji wa sehemu. Kinyume chake, HPLC haitumii pH na vichunguzi vya conductivity na vikusanya sehemu.
Infografia iliyo hapa chini inaorodhesha tofauti zaidi kati ya FPLC na HPLC katika muundo wa jedwali.
Muhtasari – FPLC dhidi ya HPLC
Chromatography ni mbinu ya uchanganuzi wa kimaabara inayotumika kutenganisha vijenzi kutoka kwa mchanganyiko. Imegawanywa katika aina kadhaa kama vile kromatografia ya safu, kromatografia ya gesi, kromatografia ya kioevu, kromatografia ya kubadilishana ioni, nk. FPLC na HPLC ni aina mbili za mbinu za kromatografia ya kioevu. FPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu ambayo hutumiwa kusafisha biomolecules kubwa kama vile protini, nyukleotidi na peptidi. Kwa upande mwingine, HPLC ni aina ya kromatografia ya kioevu ambayo hutumiwa kutenganisha misombo ndogo ya uzito wa molekuli. Kwa hivyo, huu ni muhtasari wa ni tofauti gani kati ya FPLC na HPLC.
