Tofauti kuu kati ya RP HPLC na HIC ni kwamba RP HPLC hutumia awamu ya simu ya polar zaidi na awamu ya chini ya stationary ya polar. Ilhali, HIC hutumia awamu ya kusimama haidrofobi ambayo huruhusu molekuli za haidrofobi kushikamana nayo.
Chromatography ni mbinu ya uchanganuzi ambayo husaidia kutenganisha mchanganyiko katika vijenzi vyake. Kwanza, tunapaswa kufuta sampuli ili kugawanywa katika suluhisho. Mchanganyiko huu wa suluhisho-dutu inaitwa awamu ya simu. Kisha awamu ya simu hupitishwa kupitia nyenzo nyingine inayoitwa awamu ya stationary. Awamu ya stationary huamua kujitenga kwa vipengele. Mgawanyiko hutokea kwa sababu ya mgawanyiko wa nyenzo kati ya awamu ya simu na awamu ya stationary.
RP HPLC ni nini?
Neno RP HPLC linawakilisha Kromatografia ya Kioevu ya Awamu ya Nyuma ya Utendaji wa Juu. Inahusisha mgawanyo wa vipengele katika mchanganyiko, kulingana na hydrophobicity. Vipengee vya haidrofobu katika awamu ya rununu vinaunganishwa na kano zisizohamishika za haidrofobi kwenye awamu ya tuli, ilhali vijenzi vya haidrofili huepuka kupitia awamu ya tuli bila kuunganishwa kwenye uso wa awamu ya tuli.
Kielelezo 01: Vifaa vya HPLC
Aidha, mbinu hii ina uwezo wa kuzaliana zaidi ikilinganishwa na mbinu nyingine za kromatografia, na inaonyesha matumizi mapana pia. Kwa hiyo, tunatumia njia hii katika maabara kwa zaidi ya 75% ya mbinu zote za HPLC. Mara nyingi, sisi hutumia mchanganyiko wa maji yenye maji na kutengenezea kikaboni cha polar kama sehemu ya simu. Kwa hivyo, itahakikisha kiambatisho cha vipengele vya hydrophobic katika suluhisho kwenye uso wa awamu ya stationary.
HIC ni nini?
Neno HIC linawakilisha Hydrophobic Interaction Chromatografia. Ni aina ya HPLC ya awamu ya nyuma, na njia hii hutumiwa hasa kwa kutenganisha biomolecules kubwa kama vile protini. Kwa njia hii, tunahitaji kutumia kati ya maji ili kufanya sampuli ya biomolecule. Ni kwa sababu vimumunyisho vya kikaboni vinaweza kusababisha kubadilika kwa protini. Zaidi ya hayo, mbinu hii hutumia mwingiliano kati ya molekuli kubwa na uso wa hydrophobic kidogo wa awamu ya stationary. Zaidi ya hayo, tunapaswa kutumia mkusanyiko wa chumvi nyingi katika sampuli kwa sababu inahimiza protini kubakizwa kwenye kufunga; mchakato huu unaitwa s alting nje. Kwa kupunguza msongamano wa chumvi hatua kwa hatua, tunaweza kufanya biomolecules zitoke kando kulingana na haidrofobu.
Kwa kawaida, mbinu hii hutumia masharti yaliyo kinyume na yale ya kromatografia ya kubadilishana ioni. Katika mbinu hii, kwanza, tunahitaji kupitisha suluhisho la bafa kupitia safu ili kupunguza utatuzi wa solute kwenye sampuli. Inafanya maeneo ya hydrophobic ya protini kufichua. Hata hivyo, wakati molekuli ni haidrofobu zaidi, chumvi kidogo inahitajika ili kukuza kuunganisha. Hapa, vimumunyisho kidogo vya haidrofobu hutupwa kwanza, na kulingana na mabadiliko ya mkusanyiko wa chumvi, vimumunyisho zaidi vya haidrofobu hutolewa mwisho.
Kuna tofauti gani kati ya RP HPLC na HIC?
Chromatography ni mbinu ya uchanganuzi ya kutenganisha vijenzi katika mchanganyiko. RP HPLC na HIC ni mbinu mbili maalum za kromatografia. Tofauti kuu kati ya RP HPLC na HIC ni kwamba RP HPLC hutumia awamu ya simu ya polar zaidi na awamu ya chini ya utulivu ya polar, ilhali HIC hutumia awamu ya kusimama haidrofobi, ambayo inaruhusu molekuli za haidrofobi kushikamana nayo.
Infographic hapa chini ni muhtasari wa tofauti kati ya RP HPLC na HIC.
Muhtasari – RP HPLC dhidi ya HIC
Chromatography ni mbinu ya uchanganuzi ya kutenganisha vijenzi katika mchanganyiko. RP HPLC na HIC ni mbinu mbili maalum za kromatografia. Tofauti kuu kati ya RP HPLC na HIC ni kwamba RP HPLC hutumia awamu ya rununu ya polar zaidi na awamu ya chini ya polar stationary, ambapo HIC hutumia awamu ya kusimama haidrofobi, ambayo inaruhusu molekuli za haidrofobi kushikamana nayo.
